新規癌抑制遺伝子PROX1の機能解析と臨床への応用

2006 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18590730
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 高橋 めい子 京都大学, 医学研究科, 科学技術振興助手 (20372592)
• Keywords: Prox1 / 癌抑制遺伝子 / RNA編集

Research Abstract

癌の臨床症例において、PROX1の発現や変異の調査:肝臓がん症例を用いて検証した結果、PROX1の発現と癌の文化度や患者の生命予後との間に相関関係があり、PROX1の発現が低い程文化度が低く、また生命予後も悪い事が有意に示された。膵臓がんでも、未文化のものであるほどPROX1の発現量が低いことが示された。がん細胞株でPROX1のゲノムDNAをシーケンスにかけて検索したところ変異は指摘されなかったが、同じ細胞株のRNAを回収し逆転写反応を行って得たcDNAで特定の4カ所でアデノシンからグアノシンへの同じパターンの変異が起きていることが分かった。膵がん細胞株2種類と大腸がん細胞株1種類において、PROX1の変異がゲノムではなくRNA上で起きていることが分かった。
PROX1の機能解析:まずsiRNAの実験系でPROX1の発現を抑えると細胞の増殖能は亢進し、逆にプラスミドを導入してPROX1を強制発現させると増殖能が低下することを証明した。次にTet-off/Tet-on Gene expression systemを用いて、野生型PROX1を過剰発現したものと、RNA変異を来したmutant PROX1を過剰発現したもの、及びコントロール細胞との間で機能の差異について比較検討を行った。野生型PROX1には増殖抑制作用があり、それがmutant PROX1では失われていることが示された。マウスを用いたin vivo実験でも同じ結果が得られ、野生型では腫瘍縮小効果が認められたがmutant PROX1では腫瘍のサイズはほとんど変化を認めなかった。
PROX1は細胞増殖を抑制し、変異によってその機能が失われることが、vitroとvivo双方の実験で証明された。

Research Products

• [Journal Article] Loss of function of the candidate tumor suppressor proxl by RNA mutation in human cancer cells. (2006)
  • Author(s): Takahashi, M., Yoshimoto, T., Shimoda, M., Kono, T., Koisumi, M., Yazumi, S., Shimada, Y., Doi, R., Chiba, T., Kubo, H
  • Journal Title: Neoplasia 8(12) Pages: 1003-1010
• [Journal Article] A homeobox protein proxl is involved in the differentiation, proliferation and prognosis in hepatocellular carcinoma (2006)
  • Author(s): Shimoda, M., Takahashi, M., Yoshimoto, T., Kono, T, Ikai, I., Kubo, H
  • Journal Title: Clin Can Res 12 (20) Pages: 6005-6011
• [Journal Article] Differentiation of lymphatic endothelial cells from Embryonic Stem cells on OP9 stromal cells. (2006)
  • Author(s): Kono, T., Kubo, H., Shimazu, C., Ueda Y., Takahashi, M., Yanagi, K., Fujita, N., Tsuruo, T., Wada, H., Yamashita.JK
  • Journal Title: Arterioscler Thromb Vasc Biol Sep;26 (9) Pages: 2070-2076