| Research Abstract |
接着分子L-セレクチンの多型部位を含む新規マイナー組織適合抗原ペプチドに特異的かつ増殖活性の高い細胞傷害性T細胞を誘導し,難治性白血病治療に用いることを最終目標として,前年度に引き続き研究を実施した。HLA一致ドナーからの同種造血幹細胞移植が予定されているHLA-A*2402陽性白血病患者およびドナーの血液を採取保存し,L-セレクチンのアレルをPCR-RFLP法を用いて決定した。次に,HLA-A*2402分子への親和性を考慮し,L-セレクチン多型部位を含む9アミノ酸(P型,S型各9種類)を全て合成した。ガンマインターフェロン産生能を指標に候補ペプチドをスクリーニングし,HLA stabilization assayを利用して,ペプチドとHLA-A*2402分子との結合性をフローサイトメトリーで確認した。さらに,L-セレクチン多型部位を含む100bpの遺伝子とHLA-A*2402遺伝子を導入したT2-A24/L-selectin細胞に対する細胞傷害活性誘導能を指標に,S2ペプチドがマイナー組織適合抗原として機能することを確認した。S2ペプチドをパルスしたT2-A24細胞でドナーCD8陽性細胞をS2ペプチドで繰り返し刺激することにより,S2ペプチド特異的細胞傷害性T細胞を誘導した。このS2ペプチド特異的細胞傷害性T細胞を,S2ペプチド/HLA-A24テトラマーと反応させ,PE蛍光色素の強さをフローサイトメトリーで解析し,T細胞レセプターとS2ペプチドとの結合力を評価した。加えて,S2ペプチド/HLA-A24分子テトラマーとの親和性を検討し,high-affinityTCRを保有するT細胞クローンを選別した。最後に,S型L一セレクチン陽性HLA-A*2402陽性LCLおよび患者由来白血病細胞,患者由来線維芽細胞,ドナー由来末梢血単核細胞を^<51>Crでラベルし,T細胞クローンの細胞傷害活性を検討し,high-affinity TCRの塩基配列を決定した。
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