2006 Fiscal Year Annual Research Report
新規リウマチ関節炎抑制因子FRPのシグナル伝達と免疫システムに対する作用の解析
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18591105
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
田中 真生 金沢医科大学, 医学部, 講師 (10332719)
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| Keywords | 関節リウマチ / ホリスタチン関連蛋白 / two-hybrid法 / クローニング / BIACORE |
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| Research Abstract |
1.FRP受容体(A7)の解析:萌芽研究でクローニングに成功したFRP受容体(A7)のC末端に,FLAGタグをコードするA7cDNAをdoxycycline(Dox)制御発現ベクターに組み入れたpTRE-Tight-A7を構築した.これを制御ベクターpTet-Onと共に滑膜細胞株SFー1に導入しTetOn-SF-1/A7を樹立した.このTetOn-SF-1/A7にDox,FRPおよび抗FLAG抗体Fabを添加し,FRPのシグナル伝達の効果としてc-Fosの発現を定量した.TetOn-SF-1/A7にDoxを添加すると,誘導A7のためFRPのc-Fos抑制作用が増強され,この増強は抗FLAG抗体Fabで阻害された.よってFRPのc-Fos抑制シグナルは主としてA7によって伝達されると考えた(投稿準備中).また、BIACOREを用いたA7とFRPの親和力解析では,Kd値が1-8×10-7Mと算出された.
2.セカンドメッセンジャーのクローニングFRPのシグナル伝達系の解明のため,セカンドメッセンジャーのクローニングを試みた.方法はA7と同様で,A7の細胞内ドメインをコードするA7N386をbaitとし,ヒト心臓由来のcDNAライブラリーをpreyとして,酵母のtwo-hybhd法を用いて行った.現在5つのクローン:SA240,SA263,SB224,SC21,SC23にしぼり込み解析を進めている.今後これらのtwo-hybhd反応を確認した後,塩基配列およびアミノ酸配列ホモロジー検索による同定を行い,ノザンプロッティング・RT-PCR等での発現解析,BIACOREによるKd値解析を進めていく予定である.
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[Journal Article] Cloning and expression of two human recombinant monoclonal Fab fragments specific for EBV viral capsid antigen.2007
Author(s)
Dong L., Masaki Y., Takegami T., Kawanami T., Itoh K., Jin ZX., Huang CR., Tong XP., Fukushima T., Tanaka M., Sawaki T., Sakai T., Sugai S., Okazaki T., Hirose Y., Umehara H.
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Journal Title
Int. Immunol 19・3
Pages: 331-336
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[Journal Article] Anti-aminoacyl-tRNA synthetase antibodies in clinical course prediction of interstitial lung disease complicated with idiopathic inflammatory myopathies.2006
Author(s)
Yoshifuji, H., Fujii, T., Kobayashi, S., Imura, Y., Fujita, Y., Kawabata, D., Usui, T., Tanaka.M, Nagai, S., Umehara H., Mimori, T.
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Journal Title
Autoimmunity 39・3
Pages: 233-241
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