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2006 Fiscal Year Annual Research Report

筋ジストロフィーに対するアンチセンス治療のノックアウトマウスを用いた検証

Research Project

Project/Area Number 18591152
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Research InstitutionKobe University

Principal Investigator

竹島 泰弘  神戸大学, 医学系研究科, 助教授 (40281141)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 松尾 雅文  神戸大学, 医学系研究科, 教授 (10157266)
八木 麻理子  神戸大学, 医学系研究科, 助手 (60362787)
Keywords分子治療 / 筋ジストロフィー / エクソンスキッピング / 小児神経学
Research Abstract

ジストロフィン遺伝子のエクソン欠失を有するDuchenne型筋ジストロフィー(以下DMD)に対して、アンチセンスオリゴヌクレオチド(以下AS-oligo)によってエクソンスキッピングを誘導し、out-of-frame欠失をin-frame欠失に修正する方法が有効な治療法として注目されている。しかし、本治療法を検討するために適したモデル動物が無かったため、個体での治療効果の検証は全くなされていない。本研究では、新たに作成されたDMDモデルマウスであるエクソン52ノックアウトマウスを用いて、エクソン53のスキッピングを誘導するAS-oligo治療について検討を行い、AS-oligoの至適投与量・投与間隔を設定し、筋力の改善などの治療効果を評価する。
本年度は、エクソン53のスキッピングを誘導するAS-oligoのスクリーニングを行なった。エクソン52ノックアウトマウスより骨格筋初代培養細胞を作成し、筋細胞への分化を誘導した後、リポフェクチン法を用いてエクソン53の塩基配列に対する18-20塩基のAS-oligoを導入した。導入後48時間培養を行いRNAを抽出し、RT-PCR法によってエクソン53のスキッピングを検討したところ、いくつかのAS-oligo投与によって本来のサイズより短い増幅産物が得られた。塩基配列を確認したところ、エクソン53のスキッピングを誘導されていた。本来エクソン52が欠失しout-of-frame欠失であったが、エクソン53のスキッピングが誘導されin-frame欠失のmRNAの産生が確認された。

  • Research Products

    (7 results)

All 2007 2006

All Journal Article (6 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] A nonsense mutation-created intraexonic splice site is active in the lymphocytes, but not in the skeletal muscle of a DMD patient.2007

    • Author(s)
      Tran VK
    • Journal Title

      Hum Genet. 120(5)

      Pages: 737-742

  • [Journal Article] Genetic polymorphisms associated with adverse events and elimination of methotrexate in childhood acute lymphoblastic leukemia and malignant lymphoma.2007

    • Author(s)
      Imanishi H
    • Journal Title

      J Hum Genet. 52(2)

      Pages: 166-171

  • [Journal Article] Co-occurrence of mutations in both dystrophin- and androgen-receptor genes is a novel cause of female Duchenne muscular dystrophy.2006

    • Author(s)
      Katayama Y.
    • Journal Title

      Hum Genet. 119(5)

      Pages: 516-519

  • [Journal Article] Intravenous infusion of an antisense oligonucleotide results in exon skipping in muscle dystrophin mRNA of Duchenne muscular dystrophy.2006

    • Author(s)
      Takeshima Y
    • Journal Title

      Pediatr Res. 59(5)

      Pages: 690-694

  • [Journal Article] Splicing analysis disclosed a determinant single nucleotide for exon skipping caused by a novel intraexonic four-nucleotide deletion in the dystrophin gene.2006

    • Author(s)
      Tran VK
    • Journal Title

      J Med Genet. 43(12)

      Pages: 924-930

  • [Journal Article] Novel cryptic exons identified in introns 2 and 3 of the human dystrophin gene with duplication of exons 8-11.2006

    • Author(s)
      Ishibashi K
    • Journal Title

      Kobe J Med Sci. 52(3-4)

      Pages: 61-75

  • [Book] 小児在宅医療支援マニュアル2006

    • Author(s)
      船戸正久
    • Total Pages
      200
    • Publisher
      メディカ出版

URL: 

Published: 2008-05-08   Modified: 2016-04-21  

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