酸塩基平衡を調節する腎集合管及び間在細胞における一酸化窒素の新しい役割の解明

2007 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18591206
• Research Institution: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• Principal Investigator: 渡辺 聖二 University of Occupational and Environmental Health, Japan, 医学部, 非常勤医師 (90309964)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 筒井 正人 産業医科大学, 医学部, 准教授 (70309962)
• Keywords: 皮質集合管 / 一酸化窒素 / アシドーシス / アルカローシス

Research Abstract

腎の皮質集合管(CCD)のNO産生の有無をNO蛍光検出用試薬DAF-FMDAを用い調べた。pH7.4でincubateしたところでpH6.8もしくはpH7.5のincubation solutionに変更し,蛍光顕微鏡で観察。アシドーシス環境下ではNO産生が示唆される所見を得ることができた。アルカリ性環壇下のpH7.5のincubation solutionでは所見を得ることができなかった。
また,incubation直後に同じCCDを用いAEI,PNA,AQ2抗体で2重染色を行ないNO産生がαIC,βIC,主細胞か同定を試みたが,incubation後半のpHの安定,集合管の固定の問題で同定できでいない。
次に,単離したCCDを上記と同様にDAF-FM DAを用い蛍光レイシオイメージングシステムでリアルタイムに観察、計測した。DAFをloading,wash outしアシドーシス環境下pH6.8incubation,solutionに変更。変更直後からNO産生が示唆される所見が得られた。
各シングル、トリプルNOS-KOマウスのCCDを使う研究では,トリプルNOマウスは出生早期より尿崩症に陥ることがわかうていた。,原因は皮質集合管の主細胞を中心にアポトーシスが起こり尿崩症に陥る。詳細は現段階で不明。実験ではアポトーシス前のCCDが比較検討に不可欠で出生前,出生早期のCCDを単離する必要があることが判明した。