心臓移植後の慢性拒絶反応におけるTollーlike receptorの関与の解析

2006 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18591536
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 赤坂 純逸 東北大学, 病院, 助手 (80343044)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 田林 晄一 東北大学, 大学院医学系研究科, 教授 (90142942) ; 井口 篤志 東北大学, 大学院医学系研究科, 助教授 (90222851) ; 小田 克彦 東北大学, 大学院医学系研究科, 助手 (60323002) ; 川本 俊輔 東北大学, 大学院医学系研究科, 助手 (20400244) ; 本吉 直孝 東北大学, 病院・医員 (40375093)
• Keywords: Toll-like receptor / 心臓移植 / 冠動脈硬化 / 虚血再灌流障害 / interleukin-1 beta / TNF-alpha / interleukin-10

Research Abstract

虚血再灌流障害にたいするToll-like receptorの関与を検索するために大動物を用いた実験を行なった.15-18kgのブタをドナーおよびレシピエントとして人工心肺下に同所性心臓移植を行なった.大動脈遮断、6時間の心保存ののち再灌流後、2時間で心筋の標本を採取した。形態学的な検索として、potassium pyroantimonate法でミトコンドリア内のカルシウムの蓄積を観察した。即ち、cacodylate-buffered 2.5% glutaraldehydeで心筋組繊を固定し、電子顕微鏡(Philips CM10)で観察し、ミトコンドリア内にはカルシウムの沈着を定量化した。心筋のinterleukin-1 beta(IL-1beta),IL-10およびtumor necrosis factor alpha(TNF-alpha)をエライザキットを用いて測定するための予備実験を行なった。続いて、正常心筋、再灌流後の心筋をサンプルとして測定を行ない、現在、データを処理中である。
小動物の実験では、150-200gのLewis ratをドナー、150-200gのFischer ratをレシピエントとし、また、Lewis ratをドナー、およびレシピエントとして心移植を行った。免疫抑制剤として、サイクロスポリンA(CsA)10mg/kg/日を皮下注した。心移植手技はOno-Lindsey法に準じて行った。Lurieらの方法でsclerotic grading score(SGS)として表わした冠動脈硬化は、allograftでは有意に高いことを確認した。このモデルをもちいて心筋中のIL-1 receptor、IL-1 beta、IL-6およびTNF-alphaのmRNAの発現を測定する方法について検討している。