2006 Fiscal Year Annual Research Report
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18591628
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Gifu University |
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Principal Investigator |
大野 貴敏 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 助教授 (60281052)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木村 正志 岐阜大学, 大学院医学研究科, 助手 (40260575)
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| Keywords | EWS / Flil遺伝子 / オーロラキナーゼ / ユーイング肉腫 / 転写活性 |
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| Research Abstract |
EWS/Flil遺伝子の発現を抑制すると、ユーイング肉腫細胞の増殖が抑制されるが、その際に細胞周期の調節に重要な関与をしているオーロラ遺伝子の発現も低下することが判明した。そこで、Ews/Flil遺伝子とオーロラ遺伝子の関係を研究した.
まずユーイング肉腫の臨床材料からRNAを抽出し、real time PCRによりオーロラ遺伝子が発現しているか検討した。その結果、全ての症例においてオーロラ遺伝子が強発現していることが判明した。次にEWS/Flil遺伝子は転写因子をコードするので、EWS/Flilがオーロラ遺伝子のプロモーターを活性化するか検討した。オーロラAおよびオーロラB遺伝子のプロモーターをルシフェラーゼ遺伝子に組み込み、EWS/Flil遺伝子とともにNIH3T3細胞にコトランスフェクションし、ルシフェラーゼ活性を測定したところ、コントロールに比し、オーロラA、オーロラB遺伝子のいずれのプロモーターともに著明な転写活性化が認められた。またそれはEWS/Flil蛋白量に用量依存的であった。次にオーロラA、Bそれぞれのプロモーターの欠失ミュータントを作成しルシフェラーゼアッセイを行い、転写活性に重要な領域を同定した。さらにEWS/Flilの結合部位と思われる遺伝子配列に変異を導入し、結合部位の同定を行った。加えてDNA immunoprecipitationによりEWS/Flilがオーロラ遺伝子プロモーターに結合することを証明した。
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