上皮細胞におけるSLPIによるpIgRの発現抑制について

2007 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18592012
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 岩瀬 孝志 Nihon University, 歯学部, 講師 (80125046)
• Keywords: SLPI / NF-kB / pIgR / 免疫染色 / 上皮細胞

Research Abstract

扁平上皮癌由来のCa9-19細胞におけるSLPIを抑制し,pIgRを発現するNUSD-1細胞におけるpIgRの発現とNF-κBの活性化との関係について検索を行った。
NUSD-1細胞およびCa9-22細胞をconfluentになるまで培養し、INF-γなどで細胞を10,20,30,60分間刺激した後、通法に従い核抽出物を準備する。これをSDS-PAGEで泳動した後、nylon membraneに転写した後,membraneをNF-κB、IKBα、IκBβ、Iκκα、IκκβなどNF-κBの活性化に関与する抗体を用いてwestern blotを行い、NUSD-1細胞のpIgR蛋白の産生に関与する転写活性について検討した。
その結果、NUSD-1細胞およびCa9-22細胞においてNF-κBおよびIκκαの発現をINF-γの刺激の有無におよび刺激時間に関係なく認めたが、Iκκβの発現はNUSD-1細胞では明らかな発現を認めたが、Ca9-22細胞では明らかな発現を認めなかった。さらに、IκBβはCa9-22細胞では強く、NUSD-1細胞では弱い発現を示した。これらの結果はSLPIがIκBβの発現に関与することと符合し、pIgRの発現に関与している事が示唆された。
また、腸管の上皮細胞におけるpIgRとSLPIとの組織局在を免疫染色で検索を行った。エタノール固定・パラフィン切片を脱パラフィンした後、抗ヒトSLPI抗体で1時間反応させ、PBSで洗浄し、RITC標識抗ウサギIgG抗体と1時間反応させた。切片をPBSで洗浄した後、FITC標識抗ヒトSC抗体と1時間反応後、蛍光顕微鏡で観察した。検索の結果、SLPIとpIgRの陽性部位は両者とも上皮細胞の胞体内にみられるが、発現を示す細胞は相補的であった。この結果から正常組織においてもpIgRの発現にSLPIの関与が示唆された。