2006 Fiscal Year Annual Research Report
DNA塩基成分の化学的変性を指標とした食品に照射された放射線の検出
Project/Area Number |
18602007
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Research Institution | Osaka Prefectural Institute of Public Health |
Principal Investigator |
尾花 裕孝 大阪府立公衆衛生研究所, 食品医薬品部, 主任研究員 (60191970)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
古田 雅一 大阪府立大学, 理学研究科, 准教授 (40181458)
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Keywords | 衛生 / 食品 / 放射線 / DNA / 検知 / 食品照射 / 5,6-ジヒドロチミジン / LC / MS / MS |
Research Abstract |
分析法の構築 5,6-ジヒドロチミジンの測定にはLC/MS/MSを使用し、分離カラムにはC18、移動相には0.1%酢酸とアセトニトリルのグラジエント溶出を採用し、検出はESI法でイオン化し、生成するm/z245(M+1)を分解して生じるm/z117を測定し、標準品の検出限界値は約2ng/mL程度であった。 DNAの抽出は、植物と動物試料をなるべく同じような条件で扱うために、試料にCTAB/JAS溶液を加え、ポリトロンでホモジナイズしてから、50℃で加温・振とう抽出した。DNAとして100μgの収量を目標としたため、市販キットでは負荷できる試料量の許容量を超えた。そのため精製には、フェノール+クロロホルムとの分配抽出を行い、アルコール沈殿により濃縮した。さらにRNAの除去、DNAの分解、リン酸の除去などを酵素処理によりヌクレオシドを得た。 指標適性確認 5,6-ジヒドロチミジンの指標適性については、チミジンと鮭精子DNA水溶液にγ線を照射したところ、共に照射線量依存的に5,6-ジヒドロチミジンの生成を確認した。非照射チミジン(市販試薬)中には全く検出されなかったが、鮭DNA中にはLC/MS/MSの検出限界以下の痕跡が検出された。その濃度は5mg/mLのDNA液で約2ppb以下であるが、ブランク値が存在する可能性が示唆された。一方1kGy照射による生成は100ppbレベルであり、照射の有無を明確に区別できた。日常的な環境下で5,6-ジヒドロチミジンが生成する可能性を検討するために、加熱(オートクレーブ)、紫外線照射などを行ったが、それらによる生成は認められなかった。試薬による化学反応では、水素化ホウ素Naによる水素化反応で、数十ppbレベル生成したが、同じ還元剤でも亜硫酸水素Na処理では生成が無く、酸化剤である過酸化水素処理でも生成が認められなかった。5,6-5,6-ジヒドロチミジンの検知指標性は高いと結論した。
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