IgE依存性の刺激によるヒトマスト細胞からのTSLP産生と喘息におけるその役割

2006 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18604009
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: The Institute of Physical and Chemical Research
• Principal Investigator: 岡山 吉道 独立行政法人理化学研究所, アレルギー遺伝子研究ユニット, 研究員 (80292605)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 相良 博典 獨協医科大学, 医学部呼吸器・アレルギー内科, 講師 (80275742)
• Keywords: ヒトマスト細胞 / TSLP / FcεRI / 気管支喘息 / IgE / IL-4 / プロテアーゼ

Research Abstract

気管支喘息患者16名および健常者11名の気管支粘膜生検標本を抗TSLP抗体と抗トリプターゼ抗体で二重染色したところTSLP陽性マスト細胞数は有意に喘息患者で増えており、TSLP陽性細胞の90%がマスト細胞であった。喘息患者においてマスト細胞中のTSLP陽性細胞数と血清中のIgE濃度は統計学的有意な正の相関があった(p<0.05)ことよりマスト細胞がIgE依存性の刺激でTSLPを産生していると仮説をたてた。ヒト成人末梢血由来培養マスト細胞をIgE(1μg/ml)で24時間感作した後、抗IgE抗体(3μg/ml)で刺激すると,刺激後2,6時間には刺激前に比較して4〜5倍にTSLP mRNAの発現が増強し、12時間後にはその発現レベルは減少した。マスト細胞をIL-4で前処理するとFcεRIの架橋後TSLP mRNAの発現は53±15.9倍に増強した。細胞上清中のTSLPの量をELISAで測定したところ、FcεRIの架橋による活性化後では感度以下となった。そこでリコンビナントTSLPをFcεRIの架橋による活性化後のあるいは、非刺激のマスト細胞の細胞上清とインキュベートし、TSLPをELISAで測定したところ、両者のマスト細胞上清はTSLPの濃度を下げ、特に活性化後のマスト細胞の細胞上清はTSLPの濃度を1/5以下にした。この濃度の低下はprotease inhibitorを加えることで抑制できたことから、マスト細胞由来proteaseがTSLPを分解していることが明らかとなった。そこでFcεRIの架橋後1時間で細胞を洗い、細胞の培養上清にprotease inhibitorを加えると、FcεRIの架橋による活性化後のマスト細胞の細胞上清中でTSLPは測定可能となった。したがって、マスト細胞から産生されるTSLPはマスト細胞周囲の微小環境で作用していることが示唆された。