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2006 Fiscal Year Annual Research Report

相同DNA対合活性を利用した高精度マルチプレックスPCR法の確立

Research Project

Project/Area Number 18651095
Research InstitutionThe Institute of Physical and Chemical Research

Principal Investigator

美川 務  独立行政法人理化学研究所, 城生体金属科学研究室, 研究員 (20321820)

Keywordsバイオテクノロジー / ゲノム / 核酸
Research Abstract

一検体のDNAに対して多数のPCR反応を同時に行う"マルチプレックスPCR法"が確立されればその増幅パターン解析のみで増幅元DNAの同定が可能になる.この系の確立は,医療分野における新たな検査・診断法や環境・食品分野での簡便な検定試験法への応用など,産業界に大きなインパクトを与えうる.本研究課題では,DNA相同組換えを行う酵素群を利用してPCRの初期反応を制御することにより,高精度なマルチプレックスPCR法を確立することを目的としている.
平成18年度はRecA蛋白質のDNA対合反応の最適化を試みた.具体的には蛋白質濃度やプライマー濃度,さらには塩濃度,pH,コファクター濃度など多くの因子の最適化を行い,十数のPCR反応を同時に効率良く進行させることに成功した.さらに,RecA蛋白質を改変して一本鎖DNA結合を強めた結果,より高精度なマルチプレックスPCRに成功した.また,RecA蛋白質の対合反応を調節しているRecF, RecO, RecR, SSB蛋白質を調製し,それらの性質を調べた.その結果,SSBで覆われた一本鎖DNA領域でも,RecO, RecRが同時に存在すれば,RecA蛋白質が効率良く結合できることが明らかになった.SSBはDNAの二次構造を緩和する性質があるため,これらの蛋白質を併用することにより二次構造を形成しやすいDNA領域やプライマーに対するマルチプレックスPCRの実現の可能性が示された.

  • Research Products

    (7 results)

All 2007 2006

All Journal Article (4 results) Patent(Industrial Property Rights) (3 results)

  • [Journal Article] Purification and characterization of the Thermus thermophilus HB8 RecX protein2007

    • Author(s)
      Koutaro Jimbo
    • Journal Title

      Protein Expression and Purification 51・2

      Pages: 320-323

  • [Journal Article] Identification of the RecR Toprim domain as the binding site for both RecF and RecO : A role of RecR in RecFOR assembly at dsDNA-ssDNA junctions2006

    • Author(s)
      Masayoshi Honda
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistory 281・27

      Pages: 18549-18559

  • [Journal Article] Improvements of rolling circle amplification (RCA) efficiency and accuracy using Thermus thermophilus SSB mutant protein2006

    • Author(s)
      Jin Inoue
    • Journal Title

      Nucleic Acids Research 17・3

      Pages: e69

  • [Journal Article] Heteronuclear multidimensional NMR and homology modelling studies of the C-terminal nucleotide-binding domain of the human mitochondrial ABC transporter ABCB6.2006

    • Author(s)
      Kaori Kurashima-Ito
    • Journal Title

      Journal of Biomolecular NMR 35・1

      Pages: 53-71

  • [Patent(Industrial Property Rights)] 特許権2006

    • Inventor(s)
      重森康司, 美川 務, 柴田武彦
    • Industrial Property Rights Holder
      アイシン精機(株,独)理化学研究所
    • Industrial Property Number
      特願2006-315790
    • Filing Date
      2006-11-22
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 特許権2006

    • Inventor(s)
      重森康司, 美川 務, 柴田武彦
    • Industrial Property Rights Holder
      アイシン精機(株,独)理化学研究所
    • Industrial Property Number
      特願 2006-203810
    • Filing Date
      2006-07-26
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 特許権2006

    • Inventor(s)
      重森康司, 美川 務, 柴田武彦
    • Industrial Property Rights Holder
      アイシン精機(株,独)理化学研究所
    • Industrial Property Number
      特願2006-158881
    • Filing Date
      2006-06-07

URL: 

Published: 2008-05-08   Modified: 2016-04-21  

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