2007 Fiscal Year Annual Research Report
マイクロチャンバーによるABCトランスポーター基質測定系の開発
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18657041
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| Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
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Principal Investigator |
横山 謙 Tokyo Institute of Technology, 資源化学研究所, 資源化学研究所特別研究員 (70271377)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 宏明 東京大学, 生産技術研究所, 助教 (20372427)
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| Keywords | トランスポーター / 微細加工 / 計測技術 |
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| Research Abstract |
本研究の目標は、微細加工技術(MEMS)で作成したマイクロチャンバー上の人工膜にABCトランスポーターを再構成し、その輸送活性をリアルタイムで測定する系を確立することである。本研究では、ABCトランスポーターを平面膜に組み込む必要があるが、好熱菌のABCトランスポーターの大腸菌を宿主とした発現系の構築が必要である。先年度においてATPase活性を保持したヘテロオリゴマータイプのABCトランスポーターの発現および平面膜への膜タンパク質であるV-ATPaseの再構成の確認には成功している。
ABCトランスポーターの平面膜への再構成効率を評価するために、蛍光色素を導入した。蛍光色素ラベルによりABCトランスポーターのATPase活性が消失することはなかった。1分子蛍光観察により平面膜への組み込みを調べた。効率は悪いものの、平面膜上に タンパク質由来のものと思われる輝点を多数確認した。蛍光を持つ輸送基質の取り込みをATP存在下で調べているが、背景に比べて明確なチャンバー内の蛍光強度の増加は確認されていない。その原因の一つとしてチャンバー自体の自然蛍光があり、現在チャンバーの素材の検討を行っている。
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[Journal Article] Dodecamer rotor ring defines H^+/ATP ratio for ATP synthesis of prokaryotic V-ATPase from Thermus thermophilus2007
Author(s)
Toei, H., Gerle, C., Nakano, N., Tani, K., Gyobu, N., Tamakoshi, M., Nobuhito Sone, N., Yoshida, M., Fujiyoshi, Y., *Mitsuoka, K., and Yokoyama, K
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Journal Title
The Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 103
Pages: 20256-20261
Peer Reviewed
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