2007 Fiscal Year Annual Research Report
新規DNA結合モチーフ"TTpocket"を有する機能タンパク質の探索
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18657057
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research |
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Principal Investigator |
正井 久雄 Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research, 東京都臨床医学総合研究所, 参事研究員 (40229349)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神田 大輔 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (80186618)
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| Keywords | PriAタンパク / 複製フォーク / DNA3'末端 / DNA結合 / X線構造解析 |
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| Research Abstract |
大腸菌PriAタンパク質は、停止した複製フォークを認識して結合する。PriAはN端180アミノ酸の領域にDNA結合ドメインを有し、停止複製フォークの構造を認識する。このDNA結合ドメインのN端側105アミノ酸内にDNA鎖の3'末端(three-prime terminus)を特異的に認識するポケット構造(TT pocket)が存在することを明らかにした。その高次構造をX線結晶構造解析で明らかにし、塩基配列非依存的な核酸末端の認識の構造的基盤を解明した。さらに、構造から予想される、核酸認識に重要なアミノ酸残基の置換により、3'末端認識が喪失した。現在これらの構造情報に基づき、同様な構造を有すると期待される構造をdata baseから探索することにより、他生物種、とくに真核細胞(動物細胞および分裂酵母)におけるTT pocketタンパク質の探索を行っている。また結合アッセイを用いて、in vitroにおける3'末端特異的な結合を指標に、期待される結合能を有するタンパク質の生化学的同定も行った。得られたタンパク質のMASS解析から、これらはヌクレオチド代謝に関与する酵素、およびアミノアシルtRNA合成酵素のひとつであった。これらは、いずれもヌクレオチドあるいは核酸に結合する酵素であり、DNA末端に依存した結合を示すことが説明される。現在、さらに結合活性を有する因子の探索をすすめている。また、PriA欠損株の機能相補を指標としたアッセイ系によるスクリーニングも計画している。
また、PriA欠損株の機能相補を指標としたアッセイ系によるスクリーニングも計画している。
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[Journal Article] "Spatio-temporal dynamics of multicellular cell cycle progression."2008
Author(s)
Sakaue-Sawano, A., Kurokawa, H., Morimura, T., Hanyu, A., Hama, H., Kashiwagi, S., Fukami, K., Imamura, T., Ogawa, M., Masai, H.,and Miyawaki, A.
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Journal Title
Peer Reviewed
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[Journal Article] "Cdc7-dependent phosphorylation of Mer2 facilitates initiation of yeast meiotic recombination."2008
Author(s)
Sasanuma, H., Hirota, K., Fukuda, T., Kakusho, N., Kugou, N., Kawasaki, Y., Shibata, T., Masai, H.,and Ohta, K.
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Journal Title
Genes Dev. 22
Pages: 398-410
Peer Reviewed
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[Journal Article] "Cdc7 kinase is required for Claspin phosphorylation in DNA replication checkpoint."2008
Author(s)
Kim, J-M., Yamada, M., Kakusho, N., Kanoh, Y., Takemoto, N.,and Masai, H.
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Journal Title
Peer Reviewed
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[Journal Article] "Structural basis of the 3'-end recognition of a leading strand in stalled DNAreplication forks by PriA."2007
Author(s)
Sasaki, K., Ose, T., Okamoto, N., Maenaka, K., Tanaka, T., Masai, H., Saito, M., Shirai, T.,and Kohda, D.
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Journal Title
EMBO J. 26
Pages: 2584-2593
Peer Reviewed
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