2006 Fiscal Year Annual Research Report
胚性幹(ES)細胞におけるDNA二重鎖切断修復の特徴
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18657059
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
寺岡 弘文 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (30019137)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
朝比奈 欣治 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助手 (40345294)
斉藤 佳子 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教務職員 (50178969)
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| Keywords | ES細胞 / DNA修復 / DNA損傷応答 / ゲノム安定化 / 再生医学 / 霊長類 / DNA2重鎖切断 |
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| Research Abstract |
通常の体細胞の細胞周期に比べて、ES細胞ではG1期,G2期の細胞がかなり少なく、S期とM期の割合が高い。そのため、ES細胞では、主に相同組換えによってDNA二重鎖切断修復が行われると考えられているが、非相同末端連結(NHEJ)の関与の程度については不明である。また、体細胞ではDNA損傷時には細胞周期をG1期に停止してDNAを修復する機構が存在しているが、ES細胞ではG1停止が見られない。このように、ES細胞は、体細胞とは異なった機構によって細胞周期チェックポイント/DNA損傷修復が行われていると予測できる。本研究課題では、ES細胞のDNA二重鎖切断損傷時におけるNHEJによる修復の程度と、ES細胞から分化した細胞におけるNHEJへの重点の切り替わりについて究明している。本年度は、霊長類カニクイザルES細胞培養において、比較的短期間のMEFフィーダーフリー培養によって細胞分子生物学的解析を容易にし、p21発現を中心に検討した。NCS添加によってDSBを誘導すると、その指標であるリン酸化H2AX(γ-H2AX)が検出されたが、P21タンパク質は検出されず、細胞周期解析でもG1期停止は認められなかった。しかし、p21 mRNAは増加しており、Ser15-p53のリン酸化とp53の蓄積も認められた。そこで、p21タンパク質がカニクイザルやマウスES細胞では特異的に分解されている可能性を考え、プロテアソーム系阻害剤(Lactacystin,MG-132)を加えて検討している。また、DNA鎖切断にも関わる活性酸素種(ROS)のES細胞における代謝能をDCFやNACなどを用いて調べている。
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Research Products
(6 results)
