2006 Fiscal Year Annual Research Report
間葉系腫瘍に於ける細胞内シグナル伝達系活性化と腫瘍増殖機構の解明
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18659382
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
西田 俊朗 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (40263264)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
仲 哲治 独立行政法人医薬基盤研究所, 基盤的研究部, プロジェクトリーダー (30303936)
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| Keywords | 神経鞘腫 / 平滑筋腫 / 消化管間質腫瘍 / 糖鎖修飾 / チロシンキナーゼ活性化 |
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| Research Abstract |
我々はGISTの発生と増殖の一因として、KIT或いはPDGFR□遺伝子のgain-of-function mutationsを明らかにした。本研究ではこれに引き続き、(1)KITとPDGFR□遺伝子に変異を認めない若年性GISTの発生原因、KITタンパク質の活性化原因を追及し、また同時に(2)GISTの類縁腫瘍である神経鞘腫と平滑筋腫・平滑筋肉腫の原因遺伝子検索を行う予定である。本年度は
(1)KITとPDGFR□遺伝子に変異を認めない若年性GISTに対し、1.遺伝子に変異を認めない若年発症型GISTに特異的にリン酸化の修飾を受けた蛋白のバンドを確認、質量分析計を用いてKITであることを確認、その分子量が通常のKIT蛋白より小さい事を確認した。2.若年発症型GISTでKIT下流の増殖シグナルであるSTAT、AKT、MAPKのそれぞれの活性化を確認した。3.通常型GISTと若年発症型GISTのKITのN型糖鎖の修飾を切断したところ同じ分子量になり、通常型と若年発症型の間にN型糖鎖の修飾の差が示唆された。シアル酸切断酵素にて処理しても同じ分子量となり、シアル酸修飾の差が示唆された。4.DNA-micro arrayによりmRNAの発現の差異と比較し、いくつかのシアル酸付加酵素の発現の低下を認め、特にN型糖鎖の末端のGalのシアル化に関与する働きのあるST6GAL1の発現の著明な低下を認め、northern blotting ＆ western blottingでも若年発症型GISTでST6GAL1の発現の著明な低下を確認した
(2)GISTの類縁腫瘍である神経鞘腫のプロテオーム解析でシグナル伝達系を検索した。1.チロシンリン酸基に対する抗体で膜タンパク質を沈降すると120kD部位に特異的にリン酸化を受けたタンパクを認めた。2.LC/MSとMALDI-TOF/MS解析するとこのタンパク質はBand 4.1-like protein 2(protein 4.1G)である事が確認された。
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