2008 Fiscal Year Final Research Report
Analysis of CILP (cartilage intermediate layer protein ) transgenic mice with lumbar disc disease susceptibility
Project/Area Number |
18689903
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Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
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Allocation Type | Single-year Grants |
Research Field |
Orthopaedic surgery
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Research Institution | University of Toyama |
Principal Investigator |
SEKI Shoji University of Toyama, 大学院医学薬学研究部(医学), 助教 (00432112)
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Project Period (FY) |
2006 – 2008
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Keywords | CILP / lumbar disc disease / transgenic mice |
Research Abstract |
背景: 我々は腰椎椎間板ヘルニア患者のDNAサンプルで、大規模な相関解析を行い、CILP遺伝子(cartilage intermediate layer protein)のI395Tにおいて有意な相関を見出した。さらにin vitroの機能解析から、CILP蛋白の高発現が椎間板変性に関わる可能性を見出した(Seki S et al, Nature Genet, 2005)。 研究の目的:CILPトランスジェニックマウス(以下Tg マウス)を作成し、表現型の解析やin vivoにおけるCILPの役割を詳細に検討すること。 方法: CILP Tg マウスの作成の方法は、軟骨特異的発現ベクター pNASS…(COL11A2 promoter、IVS1) を用い、このベクターにCILP遺伝子(C末にHA tagを挿入)を導入しマイクロインジェクションによってTg マウスを作成する。またこのTg マウスを用い、表現型を解析する。 結果: CILP Tg マウスのlineの維持および繁殖 遺伝子導入はPCR、mRNAはreal-time PCR法で確認し、CILP蛋白の発現解析は、HA抗体、N末、C末抗体の3種類使用し、これらでウエスタンブロット、免疫染色でTg マウスにおけるCILP蛋白の発現を確認できた。 CILP Tg マウスの表現型の解析 椎間板の構造(髄核、線維輪)を、組織学的に確認すると、サフラニン-O染色にて髄核組織の染色性が有意にTg マウス群で低下していた。さらに脊椎椎間板をMRIで評価すると、Tg マウスの腰椎MRIT2強調画像において、腰椎椎間板の輝度はノーマルマウスと比べて低下していたことから、明らかな椎間板変性の進行が認められたと考えられる。またTg マウスとノーマルマウスで、腰椎レントゲン上の椎間板高の違いを有意に認めている。 CILP Tg マウスの頚椎椎間板変性、ヘルニアモデルの作成 マウスの頚椎に不安定性を導入すると頚椎椎間板変性、ヘルニアができることがわかっており、このモデルで、変性誘導後の頚椎椎間板をレントゲン、組織学的評価を現在行っている。
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[Journal Article] Association study of COL9A2 with lumbar disc disease in the Japanese population2006
Author(s)
Shoji Seki, Yoshiharu Kawaguchi, Masaki Mori, Futoshi Mio, Kazuhiro Chiba, Yasuo Mikami, Tatsuhiko Tsunoda, Toshikazu Kubo, Yoshiaki Toyama, Tomoatsu Kimura, Shiro Ikegawa
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Journal Title
J Hum Genet. 51
Pages: 1063-7
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[Journal Article] 腰椎椎間板ヘルニアの発症メカニズム-CILPI395TのTGF-b1作用抑制を介する細胞外マトリックス発現制御の相違2006
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 木澤秀樹, 三尾 太, 森 正樹, 益田郁子, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
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Journal Title
移植 vol. 41 No.5
Pages: 519
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[Presentation] 腰椎椎間板ヘルニアの原因遺伝子 COL11A12008
Author(s)
三尾太, 千葉一裕, 松本守雄, 川口善治, 三上靖夫, 関 庄二, 森正樹, 高畑武司, 小柳貴裕, 鎌田修博, 福井康之, 河野亨, 河野仁, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第21回日本軟骨代謝学会
Place of Presentation
京都
Year and Date
20080321-22
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[Presentation] A functional SNP in cartilage intermediate layer protein (CILP) is associated with susceptibility to lumbar disc disease2008
Author(s)
Shoji Seki, Yoshiharu Kawaguchi, Kazuhiro Chiba, Yasuo Mikami, Futoshi Mio, Masaki Mori, Toshikazu Kubo, Yoshiaki Toyama, Tomoatsu Kimura, and Shiro Ikegawa
Organizer
WORLD FORUM FOR SPINE RESEARCH THE INTERVERTEBRAL DISC, 1
Place of Presentation
Kyoto
Year and Date
20080000
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[Presentation] 腰椎椎間板ヘルニアの遺伝子解析2007
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 三尾太, 森正樹, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第80回日本整形外科学会学術集会
Place of Presentation
神戸
Year and Date
20070500
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[Presentation] 腰椎椎間板ヘルニアの遺伝子解析2006
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 三尾太, 森正樹, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第21回日本整形外科基礎学術集会
Place of Presentation
長崎
Year and Date
20061000
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[Presentation] 腰椎椎間板ヘルニアの遺伝子解析2006
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 木澤秀樹, 三尾太, 森正樹, 益田郁子, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第25回運動器移植・再生医学研究会
Place of Presentation
東京
Year and Date
20060900
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[Presentation] Adjacent segment disease following expansive lumbar laminoplasty2006
Author(s)
Kawaguchi Y, Ishihara H., Kanamori M., Yasuda T., Abe Y., Nogami S., Seki S., Hori T. ,Tsuji H.,Matsui H., Nakano M.,Kimura T
Organizer
33rd annual meeting of the International Society for the Study of the Lumbar Spine
Place of Presentation
Bergen, Norway
Year and Date
20060600
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[Presentation] 腰椎椎間板ヘルニアの遺伝子解析2006
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 尾矢剛志, 三尾太, 森正樹, 益田郁子, 鎌田修博, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第79回日本整形外科学会学術集会
Place of Presentation
横浜
Year and Date
20060500
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[Presentation] COL9A2遺伝子ハプロタイプと腰椎椎間板ヘルニアとの相関2006
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 三尾太, 森正樹, 鎌田修博, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第35回日本脊椎脊髄病学会
Place of Presentation
東京
Year and Date
20060400
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[Presentation] 腰椎椎間板ヘルニアの発症メカニズムについて -CILP p.I395TのTGF-β1 作用抑制を介する細胞外マトリックス発現制御の相違-2006
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 三尾太, 森正樹, 鎌田修博, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第35回日本脊椎脊髄病学会
Place of Presentation
東京
Year and Date
20060400
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[Presentation] 腰椎椎間板ヘルニアの遺伝子解析2006
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 三尾太, 森正樹, 鎌田修博, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第35回日本脊椎脊髄病学会
Place of Presentation
東京
Year and Date
20060400
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[Presentation] 腰椎椎間板ヘルニアの遺伝子解析2006
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 木澤秀樹, 三尾 太, 森 正樹, 益田郁子, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第19回日本軟骨代謝学会
Place of Presentation
横浜
Year and Date
20060300
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[Presentation] 腰椎椎間板ヘルニアの発症メカニズムについて -CILP I395TのTGF-b. 作用抑制を介する細胞外マトリックス発現制御の相違-2006
Author(s)
関庄二, 川口善治, 千葉一裕, 三上靖夫, 木澤秀樹, 三尾太, 森正樹, 益田郁子, 久保俊一, 戸山芳昭, 木村友厚, 池川志郎
Organizer
第19回軟骨代謝学会
Place of Presentation
横浜
Year and Date
20060300
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