アプタマーを用いた網羅的組織化学法によるヘミセルロース形成機構の解明

2007 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18780133
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 粟野 達也 Kyoto University, 農学研究科, 助教 (40324660)
• Keywords: アプタマー / ヘミセルロース / 木質バイオマス / プロテオーム / 細胞壁

Research Abstract

ポプラ木部組織よりタンパク質を抽出し、ヘミセルロースまたはセルロースカラムを用いたアフィニティー精製によりそれぞれの糖に結合するタンパク質を得た。得られたタンパク質をSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離すると、複数のタンパク質が含まれることが明らかとなった。SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動後のタンパク質をエレクトロブロッティングによりPVDF膜に転写した。PVDF膜上のタンパク質バンドに初期オリゴ核酸ライブラリをインキュベートし、一本鎖DNAを吸着させた。洗浄の後、CBB染色により該当タンパク質のバンドを可視化し、そのバンドを含むPVDF膜を切り出した。
PVDF膜をPCRチューブに入れ、特異的プライマーを用いてPCR増幅した後、非対称PCRを行い、一本鎖DNAを増幅した。PVDF膜への吸着、PCR増幅を数回繰り返し、該当タンパク質に吸着するアプタマーを得た。