2007 Fiscal Year Annual Research Report
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18790108
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| Research Institution | Azabu University |
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Principal Investigator |
上家 潤一 Azabu University, 獣医学部, 講師 (10400269)
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| Keywords | P-gp / 血液脳関門 / プロテオミクス / 質量分析計 / タンパク質定量 |
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| Research Abstract |
本年度実施研究において、血液脳関門におけるP-gpの輸送活性のin ivtro輸送実験データを用いた再構築理論を確立した。P-gpタンパク質の発現量情報は輸送活性に重要な因子である。昨年度、本研究補助金交付課題の中で質量分析計を用いたP-gpタンパク質の絶対定量法を開発し、マウス血液脳関門におけるP-gpタンパク質発現量を明らかにした。本研究ではin vitro輸送実験に、LLC-PK1細胞およびmouse P-gp発現LLC-PK1細胞を用いて、P-gp基質である6化合物の経細胞輸送を測定し、flux ratioを算出した。次式を用いてmouseのK_<p brain>ratioを予測した。K_<pbrain>ratio=1+[(fluxratio_<mdrla LLC PK1>/fluxratio_<LLC-PK1>)-1] x P-gp amount_<mouseBBB>/P-gp amount_<culture cello>また、各基質の定速静注投与から脳内対血漿中濃度比(K_<p brain>)を求め、Mdrla/b knockoutとwild mouseの比(K_<p brain>ratio)を計測した。その結果、quinidine, loperamide, digoxin, dexamethasone, vinblastine, cimetidineの予測K_<pbrain>ratioはそれぞれ31,23,17,11,12,3.6であり、in vivo実測値の39,31,20,8.8,8.0,1.4と高い相関が得られた。in vivoにおけるタンパク質発現量とin vitroで測定したP-gp 1molあたりの薬物輸送活性を統合し、脳毛細血管におけるP-gp輸送活性をin silicoで再構築可能であることが実証された。本手法はトランスポーター機能研究の発展に寄与する。
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[Presentation] Protein profiling of 10 ABC Transporters (Mdrla, Bcrp, Mrp family) at the blood-brain barrier of mouse using LC-MS/MS.2007
Author(s)
J. Kamiie, Y. Katsukura, R. Iwase, K. Ohmine, K. Yanai, Y. Sekine, S. Ohtsuki, T. Terasaki
Organizer
7th Cerebral Vascular Biology International Conference.
Place of Presentation
Ottawa, Canada.
Year and Date
20070624-28
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