ゲノム2次元電気泳動法による子宮筋腫特異的なゲノム変化の同定

2006 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18791158
• Research Institution: Yamaguchi University
• Principal Investigator: 山縣 芳明 山口大学, 医学部附属病院, 助手 (30363120)
• Keywords: 子宮筋腫 / DNAメチル

Research Abstract

手術時摘出子宮から子宮筋腫組織と正常子宮筋組織を採取し、それぞれゲノムDNAを抽出し、ゲノムDNA メチル化パターンの相違を Restriction Landark Genomic Scanning (RLGS)法を用いて解析した。その結果、約1800個からなるDNA断片が展開された。子宮筋腫では正常子宮筋に比較し17個領域が低メチル化に、12個領域が高メチル化となっていた。従って、筋腫は多くの遺伝子領域のDNAメチル化異常があることが明らかとなった。RLGS解析により、正常子宮筋と子宮筋腫との間でメチル化パターンが異なっていた遺伝子領域の同定を行った。ゲノムDNAをNotI-PvuII-PstIで切断した時の理論的2次元電気泳動パターンをコンピューター上で展開した(virtual RLGS)。実際に正常子宮筋と子宮筋腫でメチル化に違いがあった領域に対応するスポットをvirtual RLGS上で抽出し塩基配列を決定する方法を用いた。これにより正常子宮筋に比べ子宮筋腫で低メチル化状態となっていた1つの領域(481bp)を同定した。実際に、この領域が子宮筋腫で低メチル化状態であることをNotIを用いたmethylation sensitive PCR法で確認した。ヒトゲノムデータベースからこの領域の遺伝子検索を行ったところ、同領域は既知の遺伝子領域ではなかったが、塩基配列から新たな遺伝子の存在が予想された。