2008 Fiscal Year Annual Research Report
胎仔小腸分離細胞の再構築過程における腸管壁内神経細胞遊走のメカニズム
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18791316
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| Research Institution | Saitama Medical University |
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Principal Investigator |
米川 浩伸 Saitama Medical University, 医学部, 講師 (00296279)
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| Keywords | 胎仔マウス小腸 / 再構築細胞塊 / 腸管壁内神経 / 細胞遊走 |
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| Research Abstract |
胎齢15.5日のICRマウスから小腸を摘出、細切し、0.1%collagenase/dispaseで消化して個々の細胞単位に分離、細胞浮遊液を作る。800回/10minで遠心分離後、上澄を捨て高濃度細胞浮遊液を作る。steinless網にmembrane filterを乗せこの上に15μlの高濃度細胞浮遊液を直径5〜6にスポットする。培養器で培養37℃, 5%CO2/95%空気の条件で約一週間培養。培養液は2日おきに取り換えた。培養液はHam F-12液(Bioproducts, Maryland)に20%ウシ胎児血、50units/mlペニシリン、50mg/mlストレプトマイシン、50mg/mlアスコルピン酸、10μl/ml non-essentia aminoacids(NEAA), 2mg/mlグルコースを含む。約2mmlの培養液(HAM F12+FBS)を加えて培養を行う。培養液は2日おきに取り換え、約1週間の培養で小腸類似の器官様構造を有する細胞塊が再構築した。経日的に細胞塊を固定して電子顕微鏡を1用いて組織学的検討を行った。前固定、後固定した後、エタノールで脱水しエポキシ樹脂に包埋した。超薄切片はウラン/鉛染色を施し透過型電子顕微鏡(H-7000Hitachl)で観察。5日目・6日目では粘膜様組織下には神経細胞は同定出来なかったが7日目で細胞塊には粘膜様組織下に神経細胞と神経線維そして神経筋接合部も認めた。
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