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2019 Fiscal Year Annual Research Report

Establishment of yeast bioassay for detection of various environmental trace contaminants and demonstration survey in Asian countries

Research Project

Project/Area Number 18H01668
Research InstitutionOsaka Prefecture University

Principal Investigator

川西 優喜  大阪府立大学, 理学(系)研究科(研究院), 准教授 (70332963)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 永吉 晴奈  地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 衛生化学部, 主任研究員 (70516757)
八木 孝司  大阪府立大学, 理学(系)研究科(研究院), 客員研究員 (80182301)
Project Period (FY) 2018-04-01 – 2022-03-31
Keywords微量汚染物質 / 酵母バイオアッセイ
Outline of Annual Research Achievements

本課題の目的は、広範な生物応答を指標に、多種多様な微量汚染物質を高感度検出する多種類のバイオアッセイ酵母を作出することである。申請者らがこれまでに作出した28種類のバイオアッセイ酵母は、核内受容体結合活性、神経伝達物質様活性、昆虫変態ホルモン様活性、DNA損傷応答誘発性、重金属応答誘発性を検出する。本課題でそれぞれの細胞壁を消化し、酵母細胞内への汚染物質流入量を向上させる。細胞外への再流出を、薬剤排出ポンプ遺伝子を破壊することで阻止する。細胞内に保持される汚染物質濃度を高めることでこれらバイオアッセイ酵母は高感度化する。それぞれの高感度化アッセイ酵母に適切な環境試料前処理法を開発する。これらを組み合わせ高感度・簡便・安価なアッセイ法として確立する。日本とアジア地域(台湾)で様々な環境試料をアッセイする実証試験をおこなう。
本年度は甲状腺ホルモン受容体、ビタミンD受容体、ファルネソイドX受容体、プレグナンX受容体、多環芳香族受容体結合活性アッセイ酵母を高感度化対象とした。
これら受容体結合アッセイ酵母の、外来異物の細胞外への排出をおこない薬剤排出ポンプとして知られる、ABCトランスポーターに属する一群のたんぱく質遺伝子を破壊した。遺伝子破壊には部位特異的組換え法の一つCre-loxP法を用いた。標的とした薬剤排出ポンプはPdr5、Pdr10であった。また細胞壁部分消化条件では細胞壁たんぱく質Cwp1、Cwp2遺伝子破壊もおこなった。これら一連の操作により物質の浸透性が高まる一方、外来異物の排出能力を欠くことで、バイオアッセイにおいて酵母細胞内の被検物質濃度が恐らく上昇し、実際に検出感度の飛躍的な改善が期待された。しかし、改善したのは多環芳香族受容体酵母のみで、甲状腺ホルモン受容体、ビタミンD受容体、ファルネソイドX受容体、プレグナンX受容体酵母の高感度化はわずかであった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

本課題の中では、実験としてもっとも時間を要するCre-loxP法による部位特異的遺伝子破壊の過半数が終了したため。

Strategy for Future Research Activity

次年度はレチノイン酸受容体 (RAR)とレチノイドX受容体アッセイ酵母を高感度化対象とする。外来異物の細胞外への排出をおこない、薬剤排出ポンプとして知られる、ABCトランスポーターに属する一群のたんぱく質遺伝子を破壊する。遺伝子破壊には本年度同様、部位特異的組換え法の一つCre-loxP法を用いる。標的すると薬剤排出ポンプはPdr5、Pdr10、Pdr11、Pdr12、Snq2、Yor1、Ste1、Aus1などである。ポンプの排出対象物とレポーター酵母の想定リガンドの関係を考慮し、バイオアッセイ酵母株ごとに破壊遺伝子と、複数破壊する場合はその組み合わせを検討する。細胞壁部分消化条件では細胞壁たんぱく質Cwp1、Cwp2遺伝子破壊も検討する。
次年度より、細胞壁消化酵素によるアッセイ酵母のプロトプラスト化を試みる。
一連の操作により物質の浸透性が高まる一方、外来異物の排出能力を欠くことで、バイオアッセイにおいて酵母細胞内の被検物質濃度が飛躍的に上昇することが期待される。また、ひきつづき関西地区およびアジア地域の環境予備調査をおこなう。

  • Research Products

    (8 results)

All 2020 2019

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (6 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results)

  • [Journal Article] Sensitivity improvement of yeast reporter bioassay for dioxin screening through inactivation of CWP and PDR genes and degrading cell walls.2020

    • Author(s)
      Masanobu Kawanishi, Kentaro Mori, Rina Yamada, Sayoko Ito-Harashima, Takashi Yagi.
    • Journal Title

      Environmental Science and Pollution Research

      Volume: accepted Pages: 0-0

    • DOI

      10.1007/s11356-019-07484-x

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] オオミジンコの幼環境試料を用いた変異型ヒト糖質コルチコイド受容体発現酵母の有用性の評価2020

    • Author(s)
      大西穂波, 原島小夜子, 川西優喜, 八木孝司
    • Journal Title

      大阪府立大学研究推進機構放射線研究センター平成30年度放射線施設共同利用報告書

      Volume: - Pages: 39

  • [Presentation] Development of yeast-based reporter assay system to detect ligands of human xenobiotic receptor, constitutive androstane receptor (CAR)2019

    • Author(s)
      Sayoko ITO-HARASHIMA, Kazuhiro SHIIZAKI, Masanobu KAWANISHI, Takashi YAGI
    • Organizer
      6th Asian/47th Japanese conference on environmental mutagens
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Establishment of ligand assay yeasts expressing juvenile hormone receptor of the European honey bee Apis mellifera2019

    • Author(s)
      Erika SANO, Sayoko ITO-HARASHIMA, Masahiro OGAWA, Takahiro KYOYA, Megumi TERADA, Masanobu KAWANISHI, Takashi YAGI
    • Organizer
      6th Asian/47th Japanese conference on environmental mutagens
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 高感度な酵母レポーター遺伝子アッセイを用いたビスフェノール関連化合物の評価2019

    • Author(s)
      小川真弘, 原島小夜子, 京谷恭弘, 川西優喜, 八木孝司, 寺田めぐみ
    • Organizer
      第46回日本毒性学会学術年会
  • [Presentation] 変異型ヒト糖質コルチコイド受容体発現酵母の有用性の評価2019

    • Author(s)
      大西穂波, 原島小夜子, 川西優喜, 八木孝司
    • Organizer
      変異機構研究会・第32回夏の学校
  • [Presentation] 環境試料を用いた変異型ヒト糖質コルチコイド受容体発現酵母の有用性の評価2019

    • Author(s)
      大西穂波, 原島小夜子, 川西優喜, 八木孝司
    • Organizer
      大阪府立大学研究連携機構放射線研究センター平成30年度放射線施設共同利用報告会
  • [Presentation] A sort of plastic additives, benzotriazole ultraviolet stabilizers as dioxin-like compounds2019

    • Author(s)
      Haruna Nagayoshi, Yoshimasa Konishi, Kensaku Kakimoto, Naoya Kakutani, Takeshi Nakano
    • Organizer
      DIOXIN2019
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2022-12-28  

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