2019 Fiscal Year Annual Research Report
宿主因子との相互作用解析から紐解く狂犬病ウイルス感染メカニズム
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18H02333
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
佐々木 道仁 北海道大学, 人獣共通感染症リサーチセンター, 特任助教 (70609403)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 狂犬病ウイルス / ウイルス感染機構 / 宿主因子 / 病原性 / 自然免疫 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
狂犬病ウイルスは致死的な神経症状を惹き起こし、毎年55,000名以上を死に至らしめる。本研究では、狂犬病ウイルス感染時のウイルスと宿主因子の相互作用解析を通じて、狂犬病ウイルスの細胞内増殖機構およびそれに対する宿主の感染制御機構の解明を目的としている。これまでに、siRNAライブラリースクリーニングを実施し、細胞の狂犬病ウイルス感受性を変化させる28個の宿主遺伝子を同定している。
昨年度より継続して上記の同定した遺伝子群のうち狂犬病ウイルスの細胞感染を促進させる宿主転写関連因子Y-box binding protein 1（YB1）の解析を実施した。YB-1の細胞内局在解析を実施し、狂犬病ウイルス感染後期になるとYB-1の局在は増殖顆粒状に変化し、狂犬病ウイルス増殖の際に細胞内に形成されるウイルスタンパク質複合体（ネグリ小体）に近接した場所に観察された。in vitro転写/翻訳アッセイおよびRNA安定性アッセイでは、ウイルス遺伝子の転写翻訳活性や安定性にYB1の量依存的な変化を認めず、YB1による狂犬病ウイルスの遺伝子発現上昇は別の機構によることが示唆された。また、昨年度に見出した狂犬病ウイルス由来mRNAのYB1結合領域に変異を導入した組換えウイルスを作出した。次年度は、このウイルスの細胞内増殖および病原性を解析する。
また、狂犬病ウイルス感染における自然免疫の役割を解析すべく、IFNR欠損マウスを用いた感染実験を開始した。
CRISPR/Cas9システムを用いて、siRNAライブラリースクリーニングにより同定した遺伝子群より選抜した遺伝子のノックアウト細胞の作出に着手したが、ノックアウト細胞の樹立には至っておらず、次年度もCRISPR/Cas9導入法の変更などプロトコールを変更してノックアウト細胞の作出を行う。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
遺伝子ノックアウト細胞の樹立が遅れているものの、YB1の機能解析が順調に進んでおり、おおよそ計画通りの進捗が得られている。
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| Strategy for Future Research Activity |
狂犬病ウイルス感染におけるYB1の機能について、これまでに得られた結果を総括し、論文発表の準備を進める。昨年度に引き続き、遺伝子ノックアウト細胞の樹立と機能解析を実施する。また、狂犬病ウイルス感染における自然免疫の役割を解析すべく、IFNR欠損マウスを用いた感染実験を実施する。
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Research Products
(4 results)
