2019 Fiscal Year Annual Research Report
Basic research for mechanism and prevention for lethal encephalitis by herpesviruses
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18H02343
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| Research Institution | Gifu University |
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Principal Investigator |
福士 秀人 岐阜大学, 応用生物科学部, 教授 (10156763)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
桐澤 力雄 酪農学園大学, 獣医学群, 教授 (70153252)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | ヘルペスウイルス / ワクチン / 致死性脳炎 / 増殖不全型ウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
I. EHV-1 遺伝子改変ウイルスの新規構築および網羅的神経病原性責任遺伝子探索
これまでに申請者らが構築した必須遺伝子欠損ウイルス(UL11 遺伝子欠損ウイルス)から免疫抑制遺伝子であるUL56を欠失させた．UL56のみを欠失させたウイルスも構築すした．これらUL52欠損ウイルスの培養細胞における増殖能は親ウイルスと同様であった． また，これまでの研究からEHV1の神経病原性に関与するとされているUL30の１アミノ酸置換ウイルス（UL30 D752N）を構築した。これら遺伝子改変ウイルスの実験動物における病原性解析を今後行う予定である。
必須遺伝子UL11の機能解析を継続した。UL11の5'側はUL12遺伝子の3'末側と部分的に重複している．UL12の3'末側に終止コドンを導入し，UL11とUL12の重複のないUL12部分欠損ウイルスを構築したところ，培養細胞における増殖に親株と差は見られなかった。そこで，このUL12部分欠損ウイルスのUL11遺伝子を改変し，改変UL11の細胞内局在を観察した。UL11の2番目のグリシンがゴルジ装置への局在に必要であることをウイルスレベルで明らかにすることができた.
II. 遺伝子改変ウイルスの致死性脳炎予防能解析
遺伝子改変半生ワクチンウイルスとしてUL11欠損ウイルスをマウスに接 種し，免疫応答を解析した.免疫応答解析として特異的リンパ球サブセット，サイトカイン発現などを調べた.神経病原性ウ イルスとして親株であるAb4pに加え，シマウマ由来EHV1を用いた攻撃試験を実施した。その結果，UL11欠損ウイルス接種マウスは，いずれの神経病原性ウイルス感染においても，臨床症状は見られず，脳炎の発症が防御された。今後，免疫応答の詳細および病理組織学的解析などを行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
年度当初の研究計画については，ほぼ計画通りに実施することができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
2019年度に構築した各種遺伝子改変ウイルスの神経病原性および脳炎発症y予防能を検索する。また，継続して新規遺伝子改変EHV1を構築する。これまでの研究結果から遺伝子の完全欠損に加え，アミノ酸レベルでEHV1の神経病原性が決められている可能性が示唆されたため，UL30遺伝子改変ウイルスおよび他の遺伝子においてもアミノ酸レベルでの改変を行い，EHV1の神経病原性発現機構を解析する。
遺伝子改変ウイルスについて，標的遺伝子の細胞内局在をはじめとした機能解析を行う。
また，半生ワクチン候補ウイルスの脳炎防御能解析を進める。
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