2018 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子改変技術を応用したロタウイルスワクチンの新たなプラットフォーム
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18H02663
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
小林 剛 大阪大学, 微生物病研究所, 准教授 (90324847)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | ロタウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ロタウイルス（RV）は、乳幼児の急性胃腸炎の原因ウイルスである。本研究課題では、新規RV遺伝子操作系技術を駆使することで、ワクチンシードウイルスとなりうる組換えRVの開発を目的に、RV感染における下痢症・腸重積症の発症機構および感染動態について解明を行う。本年度は以下の研究成果が得られた。
1)NSP遺伝子変異RV及びレポーター遺伝子発現RVの作製
RV NSP1（抗インターフェロン作用）、NSP3（翻訳制御因子）、NSP4（エンテロトキシン）についてはウイルス複製ならびに病原性に関与することが報告されている。SA11株（サルRV）由来NSP3遺伝子のC末端領域を欠損させた変異体の作製を行った。作製したNSP3変異ウイルスの培養細胞における複製能は野生型と比較して低下していた。これらの結果から、NSP3のC末端領域はウイルスの増殖に重要な役割を担っていることが示唆された。NSP1のORF領域を部分的に欠損させ、様々なレポーター遺伝子を挿入した組換えRVの作製を行った。培養細胞での長期継代後でもウイルスゲノムに挿入したレポーター遺伝子は安定的に発現されていた。
2)マウスで増殖性の高い組換えRVの作製
RV感染には種特異性があり、サルやヒトRVはマウスでの感染、増殖性は低い。SA11株をマウスで継代することで、増殖能が向上したマウス馴化SA11株の分離を試みた。また、マウスRVの人工合成系の確立も試みた。マウスRV（EW株）とサルRV（SA11株）とのリアソータントウイルスの作製に成功した。今後、得られたリアソータントウイルスの病原性解析を行う。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は、培養細胞で増殖性が異なるNSP3変異ロタウイルス（RV）の作製に成功した。外来遺伝子を安定的に発現できる組換えRVの開発に成功した。また、サルRVをバックボーンとして、マウスRV由来の分節ゲノムを持つリアソータントウイルスの作製にも成功した。これらの成果はRVの増殖機構の解明ならびにワクチンベクター開発研究に有用と考えられる。
上記の成果から、研究目的を達成する上で本年度の研究計画は概ね順調に進展している。
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| Strategy for Future Research Activity |
1)NSP遺伝子変異ロタウイルス（RV）及びレポーター遺伝子発現RVの作製
今後の研究の推進方策として、引き続き、ウイルス複製ならびに病原性に関与するNSP1、NSP3ならびにNSP4の機能領域に変異を加えた様々な組換えRVを作製し、in vitroおよびin vivoにおける性状解析を行う。NSP遺伝子内に様々なレポーター遺伝子を挿入した組換えRVを作製し、in vivoにおけるイメージング解析を行う。
2)マウスで増殖性の高いRVの作製及び解析
サルRV（SA11株）をマウスで継代することで、増殖能が向上したSA11株（マウス馴化RV）の作製を試みる。既に作製したマウスRV（EW株）とサルRV（SA11株）とのリアソータントウイルスの病原性についてマウスモデルを用いて解析を行う。マウスRVの完全な人工合成系の開発を試み、より有用なRVのマウス病態モデルの開発を行う。
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Research Products
(14 results)
