2019 Fiscal Year Annual Research Report
Integrative analysis of genetical mutations and heterogeneity based on stemness in breast cancer cells
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18H02679
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
後藤 典子 金沢大学, がん進展制御研究所, 教授 (10251448)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
東條 有伸 東京大学, 医科学研究所, 教授 (00211681)
島村 徹平 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (00623943)
鈴木 穣 東京大学, 大学院新領域創成科学研究科, 教授 (40323646)
多田 敬一郎 国立研究開発法人国立国際医療研究センター, その他部局等, 医長 (80271568)
岡本 康司 国立研究開発法人国立がん研究センター, 研究所, 分野長 (80342913)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | トリプルネガティブ乳がん |
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| Outline of Annual Research Achievements |
乳がん臨床検体のトリプルネガティブタイプを用いて、patient-derived xenograft (PDX)を作成、ここからスフェロイド培養を継続的に再現性よく行える培養条件の検討を詳細に行った。結果、3検体において、再現性よくスフェロイド培養を行える条件が整った。これらを用いて、IGF1RとNP1に対する抗体を用いてセルソーティングを行い、再現性よくIGF1Rの高い細胞群と、NP1の高い細胞群を濃縮できる条件検討を行った。2検体について、それぞれの細胞群を用いて、FluidumのC1 single cell-prep systemにより、1細胞を回収して、各細胞分画ごとに50-100個の微量RNAシークエンスを行った。同時に、それぞれの細胞群を用いて、エクソームシークエンスを行った。
現在新たにトリプルネガティブタイプ2検体について、PDX作成後、再現性よくスフェロイド培養が行えている。さらに、あとトリプルネガティブ2検体について、条件検討がすんだところで、それぞれの細胞群を用いて、FluidumのC1 single cell-prep systemにより、1細胞を回収して、各細胞分画ごとに50-100個の微量RNAシークエンスを行う。同時に、それぞれの細胞群を用いて、エクソームシークエンスを行う。解析が進んでいるものについては、情報解析を進め、親玉がん幹細胞とその性質を規定するパスウエイを絞り込む。ゲノム変異の蓄積によるがん細胞不均一性と、がん幹細胞様細胞を頂点とするヒエラルキーとの統合的な理解を目指す。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
令和2年1月までに、3検体分の乳がんシングルセル解析を開始、RNAシークエンスのデータを取得、エクソームシークエンスのデータを取得、バイオインフォマティクス解析、新たな鍵分子候補を取得を行い、令和2年3月までに、新たな鍵分子候補の解析、研究成果のとりまとめを行う予定であった。
令和2年1月、バイオインフォマティクス解析をした結果、当初の想定に反し、予想外のシグナル経路が判明した。研究遂行上、この確認が不可欠なため、計画を見直し、さらに3検体を増やして解析する必要が生じた。
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| Strategy for Future Research Activity |
バイオインフォマティクス解析をした結果、当初の想定に反し、予想外のシグナル経路が判明した。研究遂行上、予想外のシグナル経路の確認を行い、得られたデータを検討し計画を見直し、さらに3検体を増やして解析を行う。
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