2018 Fiscal Year Annual Research Report
Molecular mechanisms and preventive/therapeutic targets of colon cancer metastasis
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18H02686
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| Research Institution | Aichi Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
青木 正博 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, 分野長 (60362464)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三城 恵美 (佐藤恵美) 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, リサーチレジデント (00455544)
梶野 リエ 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, 研究員 (20633184)
小島 康 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, 主任研究員 (30464217)
藤下 晃章 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, 主任研究員 (50511870)
佐久間 圭一朗 愛知県がんセンター(研究所), がん病態生理学分野, ユニット長 (90402891)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 大腸がん / 転移 / マウスモデル / マルチオミクス解析 / プロテオーム解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
①HNRNPLLの下流標的分子および発現制御機構の解明
HNRNPLLのスプライシング標的遺伝子CTNND1 (p120 cateninをコード）についてヒト大腸がん細胞株を用いて検討し、HNRNPLLがエクソン20(エクソンB)のinclusionを促進することを見出した。エクソン20は核外移行シグナル配列(NES)を内包し、エクソン20を含むアイソフォーム3ABの一部が核に局在する一方、エクソン20を含まないアイソフォーム3Aは核に局在しないことを確認した。また、大腸がん臨床検体の浸潤先端においてp120 cateninが核に局在するがん細胞が一部存在することを見出した。一方、HNRNPLLの転写調節機構については、関与する転写因子の候補を7つ同定した。shRNAまたはsiRNAによるノックダウン効率が不十分であったため、CRISPR-Cas9システムを用いてノックアウト細胞を作成中である。
②新規大腸がん自然転移モデルを用いたマルチオミクス解析による転移機構の解明
大腸がん自然転移モデルである villin-CreERT2;Ctnnb+/loxEX3;Kras+/LSLG12D;Trp53lox/lox;Smad4lox/lox複合変異マウス(VCKPSマウス)の原発巣と肝転移巣、 および周辺の腸管正常部と肝臓正常部を用いて、比較定量プロテオーム解析とサイトカインアレイ解析を実施し、大腸がん原発巣と転移巣で発現が上昇しているタンパクを複数同定した。特にプロテオーム解析で同定したFHL2やHMGA2は、その発現が大腸がん患者の予後や転移と相関することが既に報告されており、臨床検体を用いた解析によりこれらの発現が肝転移巣で上昇していることを確認できた。この結果は我々の大腸がん自然転移モデルの臨床的妥当性を担保するものであり、引き続き同定したタンパクの転移における役割を検証する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
HNRNPLLの下流標的因子について、CTNND1のエクソン20の有無がp120 cateninの細胞内局在に影響を与えることを見出した。HNRNPLLの発現調節因子については、7つの候補分子を得てそれらの役割を検証中である。shRNAまたはsiRNAによるノックダウン効率が不十分だったことは予定外であったが、CRISPR-Cas9システムを用いてノックアウト細胞を作成中である。大腸がん自然転移モデルの解析について、大腸がん臨床検体を用いた解析でその発現が原発巣と比較して肝転移巣で上昇していることを確認できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
p120 cateninの核内での機能と核移行機序を調べるため、質量分析によるp120 catenin結合タンパクの同定を試みる。HNRNPLLの発現調節因子については、CRISPR-Cas9システムを用いてノックアウト細胞を作成するとともに、レポーター遺伝子アッセイ、qRT-PCRなどによりHNRNPLLの転写調節への関与を検証する。また、Hnrnpllのコンディショナルノックアウトマウスについても、ベクターが完成したので作出を推進する。大腸がん自然転移モデルを用いた解析については、発現変化を確認した転移制御分子候補の役割解明をさらに進める。具体的には、大腸がん細胞株や大腸がんモデルマウスに由来するオルガノイドを用いたノックダウン・強制発現実験、レーザーマイクロダイセクション・免疫染色を用いた発現細胞の同定などを行う。また、翻訳後修飾が変化する因子についても、その同定と機能解析を推進する。
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Research Products
(14 results)
