2018 Fiscal Year Annual Research Report
進行期神経芽腫に対するＫＩＲリガンド不一致臍帯血移植における分子学的基盤の解析
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18H02690
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
高橋 義行 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (40432273)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
門松 健治 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (80204519)
上條 岳彦 埼玉県立がんセンター(臨床腫瘍研究所), 臨床腫瘍研究所, 所長 (90262708)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 神経芽腫 / がん免疫 / PDX |
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| Outline of Annual Research Achievements |
＜神経芽腫患者由来腫瘍を用いた異種移植（Patient-derived Tumor Xenograft, PDXモデルの作成＞神経芽腫患者から採取された微少な腫瘍検体をNSGマウスなどの超免疫不全マウスに移植して初代マウス（F0）を作成した。同時に腫瘍検体からゲノムDNAとRNAを抽出して遺伝子発現情報や遺伝子変異、染色体のコピー数などの遺伝情報を取得する。移植後に腫瘍体積の増大が確認されたマウスから腫瘍を摘出し、次世代のマウス（F1,F2,F3）を作成する。最終的に3回以上の継代を経て得られた腫瘍組織の遺伝情報を取得し、患者由来の腫瘍検体から得られた遺伝情報との同一性を検証することでPDXモデルの樹立を確認できた。平成30年度に3例の患者検体から受理が可能であった。
＜KIRリガンド不一致CBTを行った腫瘍の分子学的基盤の解析＞
神経芽腫の予後因子である染色体コピー数（11qLOH, 1p lossなど）をアレイCGH およびSNPアレイで解析する。MYCN遺伝子のFISH (Fluorescence in situ Hybridization)法による増幅判定、DNA量をPI（Propidium Iodide）による核酸染色と、FACSによる含有量解析によってDNA ploidy解析などを行い、アロ反応性NK細胞を利用した新規免疫療法が、既存の予後因子とどのような相関があるのか解析している。
＜ＧＤ２を標的としたキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)の作成＞非ウイルスベクターであるpiggyBacトランスポゾン法を用いた遺伝子導入技術により神経芽腫細胞表面に存在するＧＤ２を標的としたモノクローナル抗体を遺伝子導入してキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)を作成した。GD2.CAR-T細胞のデザインを最適化するために、上記のＰＤＸモデルを用いて検証する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
＜神経芽腫患者由来腫瘍を用いた異種移植（Patient-derived Tumor Xenograft, PDXモデルの作成＞神経芽腫患者から採取された微少な腫瘍検体をNSGマウスなどの超免疫不全マウスに移植して初代マウス（F0）を作成した。同時に腫瘍検体からゲノムDNAとRNAを抽出して遺伝子発現情報や遺伝子変異、染色体のコピー数などの遺伝情報を取得する。移植後に腫瘍体積の増大が確認されたマウスから腫瘍を摘出し、次世代のマウス（F1,F2,F3）を作成する。最終的に3回以上の継代を経て得られた腫瘍組織の遺伝情報を取得し、患者由来の腫瘍検体から得られた遺伝情報との同一性を検証することでPDXモデルの樹立を確認できた。平成30年度に3例の患者検体から受理が可能であった。
＜KIRリガンド不一致CBTを行った腫瘍の分子学的基盤の解析＞
神経芽腫の予後因子である染色体コピー数（11qLOH, 1p lossなど）をアレイCGH およびSNPアレイで解析する。MYCN遺伝子のFISH (Fluorescence in situ Hybridization)法による増幅判定、DNA量をPI（Propidium Iodide）による核酸染色と、FACSによる含有量解析によってDNA ploidy解析などを行い、アロ反応性NK細胞を利用した新規免疫療法が、既存の予後因子とどのような相関があるのか解析している。
＜ＧＤ２を標的としたキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)の作成＞非ウイルスベクターであるpiggyBacトランスポゾン法を用いた遺伝子導入技術により神経芽腫細胞表面に存在するＧＤ２を標的としたモノクローナル抗体を遺伝子導入してキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)を作成した。GD2.CAR-T細胞のデザインを最適化するために、上記のＰＤＸモデルを用いて検証する。
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| Strategy for Future Research Activity |
＜神経芽腫患者由来腫瘍を用いた異種移植（Patient-derived Tumor Xenograft, PDXモデル）の継続＞
平成30年度に確立できたPDX1モデルを、臨床検体を用いて継続する。神経芽腫患者から採取された微少な腫瘍検体をNSGマウスなどの超免疫不全マウスに移植して初代マウス（F0）を作成する。同時に腫瘍検体からゲノムDNAとRNAを抽出して遺伝子発現情報や遺伝子変異、染色体のコピー数などの遺伝情報を取得する。移植後に腫瘍体積の増大が確認されたマウスから腫瘍を摘出し、次世代のマウス（F1,F2,F3）を作成する。最終的に3回以上の継代を経て得られた腫瘍組織の遺伝情報を取得し、患者由来の腫瘍検体から得られた遺伝情報との同一性を検証することでPDXモデルの樹立を確認し複数の患者から樹立する。
＜KIRリガンド不一致CBTを行った腫瘍の分子学的基盤の解析＞神経芽腫の予後因子である染色体コピー数（11qLOH, 1p lossなど）をアレイCGH およびSNPアレイで解析する。MYCN遺伝子のFISH (Fluorescence in situ Hybridization)法による増幅判定、DNA 量をPI（Propidium Iodide）による核酸染色と、FACSによる含有量解析によってDNA ploidy解析などを行い、アロ反応性NK細胞を利用した新規免疫療法が、既存の予後因子とどのような相関があるのか検討する。
＜ＧＤ２を標的としたキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)の作成＞非ウイルスベクターであるpiggyBacトランスポゾン法を用いた遺伝子導入技術により神経芽腫細胞表面に存在するＧＤ２を標的としたモノクローナル抗体を遺伝子導入してキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)を作成し、最適化するためにＰＤＸモデルで検証し臨床研究の基盤研究を進める。
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[Journal Article] Integrated molecular profiling of juvenile myelomonocytic leukemia2018
Author(s)
Murakami Norihiro、Okuno Yusuke、Yoshida Kenichi、Shiraishi Yuichi、Nagae Genta、Suzuki Kyogo、Narita Atsushi、Sakaguchi Hirotoshi、Kawashima Nozomu、Wang Xinan、Xu Yinyan、Chiba Kenichi、Tanaka Hiroko、Hama Asahito、Sanada Masashi、Kojima Seiji、Ogawa Seishi、Takahashi Yoshiyuki、Muramatsu Hideki、et al
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Journal Title
Blood
Volume: 131
Pages: 1576～1586
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Evalution of complication in cord blood transplantation from KIR ligand incompatible donor.2019
Author(s)
Atsushi Narita, Shunsuke Miwata, Kotaro Narita, Hironobu Kitazawa, Shinsuke Kataoaka, Motoharu Hamada, Rieko Taniguchi, Daisuke Ichikawa, Norihiro Murakami, Kyogo Suzuki, Eri Nishikawa, Nozomu Kawashima, Yusuke Okuno, Hideki Muramatsu, Nobuhiro Nishio, Seiji Kojima, Yoshinori Ito, Takahahsi Yoshiyuki.
Organizer
第41回造血細胞移植学会総会
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[Presentation] 骨髄MRDの消失は神経芽腫に対するKIRリガンド不一致同種臍帯血移植後の移植片対腫瘍効果を示唆する2018
Author(s)
Nobuhiro Nishio, Shinsuke Kataoka, Shunsuke Miwata, Kotaro Narita, Hironobu Kitazawa, Motoharu Hamada, Daisuke Ichikawa, Rieko Taniguchi, Norihiro Murakami, Kyogo Suzuki, Nozomu Kawashima, Eri Nishikawa, Yusuke Okuno, Atsushi Narita, Hideki Muramatsu, Seiji Kojima, Yoshiyuki Takahashi.
Organizer
第60回日本小児血液・がん学会学術集会
