2019 Fiscal Year Annual Research Report
進行期神経芽腫に対するＫＩＲリガンド不一致臍帯血移植における分子学的基盤の解析
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18H02690
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
高橋 義行 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (40432273)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
門松 健治 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (80204519)
上條 岳彦 埼玉県立がんセンター(臨床腫瘍研究所), 臨床腫瘍研究所, 所長 (90262708)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 神経芽腫 / がん免疫 / PDX |
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| Outline of Annual Research Achievements |
＜神経芽腫患者由来腫瘍を用いた異種移植（Patient-derived Tumor Xenograft, PDXモデルの作成＞
神経芽腫患者から採取された微少な腫瘍検体を超免疫不全マウス（NSGマウス）に移植して初代マウス（F0）を作成した。同時に腫瘍検体からゲノムDNAとRNAを抽出して遺伝子発現情報や遺伝子変異、染色体のコピー数などの遺伝情報を取得する。移植後に腫瘍体積の増大が確認されたマウスから腫瘍を摘出し、次世代のマウス（F1,F2,F3）を作成する。最終的に3回以上の継代を経て得られた腫瘍組織の遺伝情報を取得し、患者由来の腫瘍検体から得られた遺伝情報との同一性を検証することでPDXモデルの樹立を確認できた。これまで10例の患者検体から3例のPDXライブラリが樹立している。
＜KIRリガンド不一致CBTを行った腫瘍の分子学的基盤の解析＞
神経芽腫の予後因子である染色体コピー数（11qLOH, 1p lossなど）をアレイCGH およびSNPアレイで解析する。MYCN遺伝子のFISH (Fluorescence in situ Hybridization)法による増幅判定、DNA量をPI（Propidium Iodide）による核酸染色と、FACSによる含有量解析によってDNA ploidy解析などを行い、新規がん免疫療法の予後因子を解析している。
＜GD2を標的としたキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)の作成＞
非ウイルスベクターであるpiggyBacトランスポゾン法を用いた遺伝子導入技術により神経芽腫細胞表面に存在するGD2を標的としたモノクローナル抗体を遺伝子導入してキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)を作成し、既存の神経芽腫細胞株に対する細胞傷害活性を確認できた。GD2.CAR-T細胞のデザインを最適化するために、上記のPDXモデルを用いて検証する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
＜神経芽腫患者由来腫瘍を用いた異種移植（Patient-derived Tumor Xenograft, PDXモデルの作成＞
神経芽腫患者から採取された微少な腫瘍検体を超免疫不全マウス（NSGマウス）に移植して初代マウス（F0）を作成した。同時に腫瘍検体からゲノムDNAとRNAを抽出して遺伝子発現情報や遺伝子変異、染色体のコピー数などの遺伝情報を取得する。移植後に腫瘍体積の増大が確認されたマウスから腫瘍を摘出し、次世代のマウス（F1,F2,F3）を作成する。最終的に3回以上の継代を経て得られた腫瘍組織の遺伝情報を取得し、患者由来の腫瘍検体から得られた遺伝情報との同一性を検証することでPDXモデルの樹立を確認できた。これまで10例の患者検体から3例のPDXライブラリが樹立している。
＜KIRリガンド不一致CBTを行った腫瘍の分子学的基盤の解析＞
神経芽腫の予後因子である染色体コピー数（11qLOH, 1p lossなど）をアレイCGH およびSNPアレイで解析する。MYCN遺伝子のFISH (Fluorescence in situ Hybridization)法による増幅判定、DNA量をPI（Propidium Iodide）による核酸染色と、FACSによる含有量解析によってDNA ploidy解析などを行い、新規がん免疫療法の予後因子を解析している。
＜GD2を標的としたキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)の作成＞
非ウイルスベクターであるpiggyBacトランスポゾン法を用いた遺伝子導入技術により神経芽腫細胞表面に存在するGD2を標的としたモノクローナル抗体を遺伝子導入してキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)を作成し、既存の神経芽腫細胞株に対する細胞傷害活性を確認できた。GD2.CAR-T細胞のデザインを最適化するために、上記のＰＤＸモデルを用いて検証する。
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| Strategy for Future Research Activity |
＜神経芽腫患者由来腫瘍を用いた異種移植（Patient-derived Tumor Xenograft, PDXモデル）の継続＞
引き続き確立できたPDXモデルを、臨床検体を用いて継続する。神経芽腫患者から採取された微少な腫瘍検体をNSGマウスなどの超免疫不全マウスに移植して初代マウス（F0）を作成する。同時に腫瘍検体からゲノムDNAとRNAを抽出して遺伝子発現情報や遺伝子変異、染色体のコピー数などの遺伝情報を取得する。移植後に腫瘍体積の増大が確認されたマウスから腫瘍を摘出し、次世代のマウス（F1,F2,F3）を作成する。最終的に3回以上の継代を経て得られた腫瘍組織の遺伝情報を取得し、患者由来の腫瘍検体から得られた遺伝情報との同一性を検証することでPDXモデルの樹立を確認し複数の患者から樹立する。
＜KIRリガンド不一致CBTを行った腫瘍の分子学的基盤の解析＞
神経芽腫の予後因子である染色体コピー数（11qLOH, 1p lossなど）をアレイCGH およびSNPアレイで解析する。MYCN遺伝子のFISH (Fluorescence in situ Hybridization)法による増幅判定、DNA 量をPI（Propidium Iodide）による核酸染色と、FACSによる含有量解析によってDNA ploidy解析などを行い、新規がん免疫療法の予後因子を解析する。
＜GD2を標的としたキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)の作成＞
非ウイルスベクターであるpiggyBacトランスポゾン法を用いた遺伝子導入技術により神経芽腫細胞表面に存在するGD2を標的としたモノクローナル抗体を遺伝子導入してキメラ抗原受容体遺伝子導入Ｔ細胞（CAR-T)を作成し、最適化するためにPDXモデルで検証し臨床研究の基盤研究を進める。
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[Journal Article] Autologous Stem Cell Transplantation for Children With Renal Tumors, and Adults With Wilms Tumor: Retrospective Analysis of the Japanese Transplant Registry Unified Management Program.2020
Author(s)
Kobayashi R, Inoue M, Takahashi Y, Kikuta A, Ogawa A, Koga Y, Koh K, Hashii Y, Hara J, Kato K, Tabuchi K, Matsumoto K
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Journal Title
J Pediatr Hematol Oncol
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] MYCN de novo gain-of-function mutation in a patient with a novel megalencephaly syndrome.2019
Author(s)
Kato K, Miya F, Hamada N, Negishi Y, Narumi-Kishimoto Y, Ozawa H, Ito H, Hori I, Hattori A, Okamoto N, Kato M, Tsunoda T, Kanemura Y, Kosaki K, Takahashi Y, Nagata KI, Saitoh S
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Journal Title
J Med Genet
Volume: 56
Pages: 388-395
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Clinical Outcomes after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation in Children with Juvenile Myelomonocytic Leukemia: A Report from the Japan Society for Hematopoietic Cell Transplantation.2019
Author(s)
Yoshida N, Sakaguchi H, Yabe M, Hasegawa D, Hama A, Hasegawa D, Kato M, Noguchi M, Terui K, Takahashi Y, Cho Y, Sato M, Koh K, Kakuda H, Shimada H, Hashii Y, Sato A, Kato K, Atsuta Y, Watanabe K; Pediatric Myelodysplastic Syndrome Working Group of the Japan Society for Hematopoietic Cell Transplantation.
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Journal Title
Biol Blood Marrow Transplant
Volume: S1083-8791
Pages: 30835-3
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Human herpesvirus-6B infection in pediatric allogenic hematopoietic stem cell transplant patients: Risk factors and encephalitis.2019
Author(s)
Miura H, Kawamura Y, Hattori F, Tanaka M, Kudo K, Ihira M, Yatsuya H, Takahashi Y, Kojima S, Sakaguchi H, Yoshida N, Hama A, Yoshikawa T
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Journal Title
Transpl Infect Dis
Volume: 22
Pages: e13203
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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