2021 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidation of the amplification mechanism using cultured human prion persistent infection cells and development of novel prevention and treatment for prion diseases
| Project/Area Number |
18H02721
|
|---|
| Research Institution | University of Miyazaki |
|---|
Principal Investigator |
新 竜一郎 宮崎大学, 医学部, 教授 (90452846)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岩丸 祥史 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 動物衛生研究部門, グループ長補佐 (20355142)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | プリオン病 / 孤発性クロイツフェルトヤコブ病 / RT-QuIC法 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
プリオン病は致死性の神経変性疾患であり、ヒトの孤発性クロイツフェルトヤコブ病（sCJD）等が代表的な疾患である。孤発性や遺伝性プリオンでは生体内で自発的に異常型プリオンタンパク質（PrP）が生成し、神経系で増幅して発病に至ると考えられるが、その自発生成機構と増幅機構についての解明はいまだ途上である。本研究ではそれらの解明に向け、１）ヒトプリオンが培養細胞に感染したか高感度で判定可能な我々が開発したRT-QuIC法を応用することにより、ヒトプリオンの細胞への感染様式やとその増幅機構の解明、２）バキュロウイルス-昆虫細胞発現系からの組換えプリオンタンパク質（Bac-rPrP）と昆虫細胞由来の補助因子を用いてプリオン自発生成機構の解明を目的とする。１）ではこれまでに複数のヒトグリオーマ細胞あるいはニューロブラストーマ細胞を入手し、その増殖特性や正常型PrPの発現レベルとPrP配列多型の解析を行った。それらの培養細胞にsCJD由来の脳乳剤を曝露し、それらが持続的にヒトプリオンに感染するかについてRT-QUIC法によって検証を行った。その結果、数回の継代まではプリオンシード活性が検出されたが、その後、徐々に消失することが判明した。２）では37 ℃の反応では異常型PrPの自発的生成は見られなかったが、45 ℃では、すべての反応で異常型PrPが生成した。注目すべきは、同じ実験条件下で、プロテイナーゼKに対する耐性と増幅時の補酵素依存性が異なる様々な異常型PrPの亜型が生成したことである。しかし、それらの特徴もさらに反応を継続すると消失し、単一のものに収束した。本研究によりヒトプリオンの培養細胞における持続感染の消失過程と異常型PrPの試験管内における複数の亜型の自発生成機構とその競合過程が明らかとなった。
|
| Research Progress Status |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
|
| Strategy for Future Research Activity |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
|
