2019 Fiscal Year Annual Research Report
腸内細菌叢の異常と肝癌リスクの増大―新しいNASHモデルによる生体防御機構の解明
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18H02884
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| Research Institution | Tokyo Women's Medical University |
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Principal Investigator |
山本 雅一 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60220498)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柳川 徹 筑波大学, 医学医療系, 教授 (10312852)
有泉 俊一 東京女子医科大学, 医学部, 准教授 (40277158)
徳重 克年 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60188729)
蕨 栄治 筑波大学, 医学医療系, 講師 (70396612)
正田 純一 筑波大学, 医学医療系, 教授 (90241827)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | NASH / 肝癌 / 遺伝子レスキューマウス / LPS / 腸管透過性 / 高カロリー食 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
筑波大学と連携してNASHと肝癌を自然発症するSqstm1およびNrf2遺伝子二重欠失（DKO）マウスを用いて，腸内細菌の dysbiosisとLPS増加による肝発癌の誘導に対して，Keap1-Nrf2 pathwayの肝発癌の抑止の生体防御機構の詳細について解明している．
腸管上皮Nrf2の肝発癌における役割を明らかにするため，腸管上皮細胞にのみNrf2を発現する腸管上皮特異的Nrf2レスキューマウスの作製を試みた．Nrf2ノックインマウス（KIKI）の繁殖過程で遺伝子型判定（ジェノタイピング）に一部不具合があり，確認と修正のため繁殖に遅れが出たが，Vill-Creマウスとの掛け合わせにより腸管上皮特異的Nrf2遺伝子レスキューマウス（最終遺伝子型Nrf2KI/KIかつVil-cre/+）の作製に成功した．今後，繁殖を継続する．
この間，DKOマウスに60%高脂肪食を26週間摂餌し肝発癌促進モデルを作製し，解析を行った．高脂肪食（HF）群は，通常食（NC）群と比較して更に高度肥満（HF:57.5 g，NC: 47.7 g）を呈し，NASH病態のSAF scoreでは脂肪化（HF: 2.2, NC: 0.9），炎症（HF: 1.9, NC: 0.8），線維化（HF: 3.9, NC: 0.6）といずれも高値であったが，特に線維化が高度であった．更に，HF群では35%（16例/46匹）に腫瘍が発生し，NC群の12%と比較して顕著に発癌が促進された．
本学消化器外科で外科手術により収集された，NASH肝癌50症例，慢性C型肝炎由来肝癌50症例，大腸癌肝転移50症例のヒト肝癌臨床標本について，HE染色，p62，Keap1，LC3Aの免疫染色を行った（Genostaff社に一部外部委託）．現在，免疫組織学的な視点から癌部非癌部の染色パターンを解析中である．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Nrf2ノックインマウス（KIKI）の繁殖過程で遺伝子型判定（ジェノタイピング）に一部不具合があり，確認と修正のため繁殖に遅れが出たが，腸管上皮特異的Nrf2遺伝子レスキューマウスの作製に成功した．今後，繁殖を継続し実験
に供する．新規に作製したNrf2腸管特異的レスキューマウスの表現型について解析中である．
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| Strategy for Future Research Activity |
腸管上皮特異的Nrf2レスキューマウスについては，解析に十分な個体数が揃った段階で（各群10-20匹程度を想定），通常食を対照として60%高脂肪食摂餌を開始する．32週齢で解剖し，全身p62およびNrf2遺伝子二重欠失（DKO）マウスと，NASH肝癌の個数，大きさ，悪性度，病理学的特徴などの表現型を比較解析し，腸管上皮細胞のNrf2レスキューがNASHおよび肝発癌を抑止し得るかどうかを解析する．また，これらのマウスの糞便を回収して腸内細菌叢のプロフィールを解析し，血清・糞便中のLPS体内動態と腸管上皮細胞のNrf2がどのように関連するかを明らかにする．
ヒト肝癌臨床標本を用いた解析については，multiubiquitin, Masson trichromeの免疫染色を追加し，既に染色したp62，Keap1，LC3Aとの位置関係，発現パターンの相同性などについて引き続き解析を行う．また，免疫染色の解析結果と患者情報（病歴，血液検査結果，予後情報）などとの関係性について統計学的手法を用いて解析する．
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[Journal Article] Urinary levels of Titin-N flagment, a skeletal muscle damage maker, are increased in subjects with Nonalcoholic fatty liver disease.2019
Author(s)
Oshida N, Shida T, Oh S, Kim T, Isobe T, Okamoto Y, Kamimaki T, Okada K, Suzuki H, Ariizumi S, Yamamoto M, Shoda J
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Journal Title
Sci Rep
Volume: 9
Pages: 19498
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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