2020 Fiscal Year Annual Research Report
Basic study of CAR-NK cell therapy derived from iPS cells.
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18H02915
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
中瀬 裕之 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (10217739)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中村 光利 奈良県立医科大学, 医学部附属病院, 研究員 (00305715)
中澤 務 奈良県立医科大学, 医学部, 研究員 (00772500)
松田 良介 奈良県立医科大学, 医学部, 学内講師 (60453164)
西村 文彦 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (70433331)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | glioblastoma / iPS / EGFRvIII / CAR 遺伝子 / natural killer 細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
未だ満足のいく治療成績が得られていない予後不良の悪性腫瘍である膠芽腫に対する根治療法の確立を目指し、induced pluripotent stem cell (iPSC) にレンチウイルスベクターを用いてepidermal growth factor receptor, transcript variant III (EGFRvIII) 特異的 chimeric antigen receptor (CAR) 遺伝子を導入し、 natural killer 細胞 (NK) へ分化誘導した後に EGFRvIII 特異的 CAR発現 iPS-NK を作成した。まず、EGFRvIII 特異的 CAR 発現 iPSC について多能性幹細胞としての特性、染色体ならびにゲノム DNA の損傷について解析を行い、発がん性の遺伝子変異などが発現していない事を確認した。次に、EGFRvIII 特異的 CAR-iPSC の品質確認を行い、既に樹立した EGFRvIII 特異的 CAR-iPSC について、RT-PCR による多能性解析も行った。また、NOGマウスを用いて in vivo における奇形腫形成能も評価した。また、G-band 法による染色体分析、次世代シークエンサーによる iPS 細胞のゲノム DNA 解析を行い安全性も確認した。
EGFRvIII 特異的 CAR-iPSC は2か月以上継代培養すると CAR の発現が低下することが判明したため、必要に応じて磁気ビーズを用いてその純度を高めた。また、シングルセルクローニングを行うことで安定株を樹立することができた。EGFRvIII 特異的 CAR発現 iPS-NK は、in vitro ならびに NOGマウスの脳内膠芽腫細胞移植モデルを用いた in vivo における膠芽腫に対する抗がん効果と、その安全性を示すことができた。
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| Research Progress Status |
令和2年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和2年度が最終年度であるため、記入しない。
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