2018 Fiscal Year Annual Research Report
Disease-specific iPS study in uveitis
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18H02959
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| Research Institution | Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
杉田 直 国立研究開発法人理化学研究所, 生命機能科学研究センター, 副プロジェクトリーダー (10299456)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大西 暁士 国立研究開発法人理化学研究所, 生命機能科学研究センター, 上級研究員 (70569102)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | iPS細 / 網膜 / 病態モデル / 再生医療 / ぶどう膜炎 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ベーチェット病や原田病ぶどう膜炎の標的網膜細胞の検索、標的抗原の検索、治療法スクリーニングを行うために、初年度 (2018-2019) に、標的細胞としてヒトiPS細胞由来RPE細胞およびガングリオン細胞樹立を行った。iPS-RPE細胞の品質規格試験、RPE特異的遺伝子発現（RPE65など: RT-PCR）、RPE純度試験（Bestrophinなど: 免疫染色）、増殖因子分泌試験（VEGF/PEDF: ELISA）、視細胞外節の貪食試験（蛍光顕微鏡）では問題はなく、RPEが樹立できた。HLA-DR4陽性の原田病ぶどう膜炎患者（１名）、HLA-DR4陽性の健常人（１名）およびHLA-DR4陰性の健常人（１名）から樹立して、来年度のassay用に複数のiPS細胞由来RPE細胞を用意、保存した。
また、ヒトiPS細胞由来3D retina（視細胞や神経網膜を含む）を分化・誘導した。品質規格試験、視細胞特異的遺伝子発現（RT-PCR）、ガングリオン細胞特異的遺伝子発現（RT-PCR）、視細胞およびガングリオン細胞純度試験（免疫染色）では問題はなく網膜の樹立できた。ガングリオン細胞の単離はImmunopaning法もしくはMACSで行い、最終的にSMI、Brn-3bの染色で純度を確認した。ガングリオン細胞は、HLA-B51陽性のベーチェット病ぶどう膜炎患者（１名）、HLA-B51陽性の健常人（１名）およびHLA-B51陰性の健常人（１名）から樹立して来年度のassay用に大量に保存した。
次年度 (2019-2020)は、ベーチェット病ぶどう膜炎は3D retinaやガングリオン細胞を用いたin vitro病態モデル、原田病ぶどう膜炎はメラノサイトとRPE細胞を用いたin vitro病態モデル作成を遂行する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度 (2018-2019) に、ヒトiPS細胞由来RPE細胞およびヒトiPS細胞由来ガングリオン細胞樹立を行った。これらは当初の予定通りであり、それ以上、それ以下でもない。
ヒトiPS細胞由来RPE細胞は当研究室で多数の実績があり、予定通りその樹立を問題なく行えた。一方、ヒトiPS細胞由来ガングリオン細胞は3D retina分化誘導に時間がかかるため１年間かけて３ラインを作成する事が出来た。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度 (2019-2020)は、ベーチェット病は3D retinaやガングリオン細胞を用いたin vitro病態モデル、原田病はメラノサイトとRPE細胞を用いたin vitro病態モデル作成を遂行する予定である。現時点ではヒトiPS細胞由来のメラノサイトの樹立に成功していない。もし出来ない場合は同じ色素がありメラノサイト抗原を発現しているRPE細胞のみで行う予定である。患者さまのリクルート（検体採取）は、年間かなりの数のベーチェット病ぶどう膜炎や原田病ぶどう膜炎患者が来院されるので問題ないと思われる。
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