2018 Fiscal Year Annual Research Report
Accurate measurement of natural toxins in body fluids using deuterated standards and search of specific markers for the rapid diagnosis
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18H03064
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
石井 晃 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (30252175)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高橋 秀依 東京理科大学, 薬学部薬学科, 教授 (10266348)
林 由美 名古屋大学, 医学系研究科(保健), 講師 (30632707)
財津 桂 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (30700546)
妹尾 洋 愛知医科大学, 医学部, 教授 (50236113)
小川 匡之 愛知医科大学, 医学部, 講師 (50559937)
草野 麻衣子 名古屋大学, 環境医学研究所, 特任助教 (60733574)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 法医学 / 法中毒 / 質量分析 / タンデム質量分析 / 自然読 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
重水素標識自然毒標品の作成については、現在いくつかの化合物を作成した後、安定性等の検討を行っている。次いで、植物性自然毒の測定については、Veratrumアルカロイド７種とAmaryllidaceaeアルカロイド２種、Solanumアルカロイド３種の計12種を対象に分析を行った。これらアルカロイドを添加した血清試料を、MonoSpin C18を用いた固相抽出法で精製した。その後、精製試料をLC-MS/MSで分析した。LCは、島津社製のNexera XR、タンデム質量分析計はSCIEX社製QtrAP4500を使用した。分離条件は、CAPCELL PAK ADME （2.1 x 150 mm, 3 microm)を用い、移動相は、A: ギ酸アンモニウム/水/アセトニトリル、B: ギ酸アンモニウム/メタノール/アセトニトリルを用いたグラジエントで分離を行った。移動相の流速は0.3 mL/minで、イオン化法はポジティブESI、測定モードはMRMモードで測定した。 検量線は、Veratrum及びAmaryllidaceaeアルカロイドは0.05 - 50 ng/mLで、Solanumアルカロイドは 0.5 - 50 ng/mLの範囲で作成した。これら自然毒の検量線は、良好な直線性を呈していた。また、測定値の品質管理のため、低濃度は0.25 ng/mLないし2.5 ng/mL、高濃度は40 ng/mLで日内変動を分析した。その結果、全てのアルカロイドについて、真度(accuracy)はプラスマイナス 16 %以内、精度(precision)は15 %以内と良好な結果が得られ、今後ジャガイモを喫食した被験者からのsolanumアルカロイドの検出を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
重水素標識自然毒標品については、現在作成中で、今後標品が入手可能になると考えられる。ヒト体液中の自然毒の分析に関しては、上述したように、分析法を開発中であり、良好な再現性を得ることができた。従って、本研究は、概ね順調に進展していると言える。代謝物の検索については、今後培養細胞を用いることも検討する。
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| Strategy for Future Research Activity |
重水素標識自然毒の標品が完成するまでの間、いくつかの重水素及び13C標識内部標準を試み、現在のところは成功していおり、当分はこの方法による測定法を完成させる。
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