2019 Fiscal Year Annual Research Report
脂肪酸代謝の異常と肝癌リスクの増大―新しいNASHモデルによる生体防御機構の解明
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18H03197
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| Research Institution | Tokyo Women's Medical University |
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Principal Investigator |
有泉 俊一 東京女子医科大学, 医学部, 准教授 (40277158)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
徳重 克年 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60188729)
山本 雅一 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60220498)
蕨 栄治 筑波大学, 医学医療系, 講師 (70396612)
岡田 浩介 筑波大学, 附属病院, 病院講師 (80757526)
正田 純一 筑波大学, 医学医療系, 教授 (90241827)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | NASH / 遺伝子改変マウス / 肝発癌 / 遺伝子ノックイン / 脂肪酸代謝 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は，NASHおよびNASH肝癌モデル（筑波大学にて開発）において，肝発癌に対するNrf2およびp62抑止的役割を解明することを目的に研究を実施した．
1.組織細胞特異的p62およびNrf2遺伝子レスキューマウスの作製：p62およびNrf2遺伝子の
イントロンに，LoxP配列で挟まれた転写終結シグナルおよびpolyA付加シグナル配列を挿入したノックインマウス（p62 KI/KI, Nrf2KI/KI）を作製した．このマウスとp62-/-またはNrf2-/-マウスとの交配により，Nrf2KI/KIかつp62-/-マウスとp62KI/KIかつNrf2-/-マウスを得た（このマウスは，全身でp62およびNrf2遺伝子が二重欠損しており，NASHを発症する）．次に，組織特異的にp62とNrf2の発現をレスキューするために，Creマウスとの交配を行った．p62KIKIかつNrf2-/-系統（p62レスキュー）の作製繁殖を優先して行い，p62KIKIかつNrf2-/-かつAlbumin-cre/+マウス（肝細胞特異的p62レスキューマウス），p62KIKIかつNrf2-/-かつAdipoq-cre/+マウス（脂肪細胞特異的p62レスキューマウス），p62KIKIかつNrf2-/-かつLyz2-cre/+マウス（Kupffer細胞特異的p62レスキューマウス）の作製に成功した．
2．ヒト肝癌臨床検体を用いた解析：本学消化器外科で外科手術により収集された，NASH肝癌50症例，慢性C型肝炎由来肝癌50症例，大腸癌肝転移50症例について，HE染色，p62，Keap1，LC3Aの免疫染色を行った（Genostaff社に一部外部委託）．現在，免疫組織学的な視点から癌部非癌部の染色パターンを解析中である．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Nrf2ノックインマウス（KIKI）の繁殖過程で遺伝子型判定（ジェノタイピング）に一部不具合があり，確認と修正のため繁殖に遅れが出ている．今後，準備が出来次第，組織特異的にNrf2の発現をレスキューするために，Vill-Cre（腸管上皮），Albumin-Cre（肝細胞），Adipoq-Cre（脂肪細胞），Lyz2-Cre（Kupffer細胞）マウスとの交配を開始する．これらの維持管理は筑波大学生命科学動物資源センターで管理を行っている．
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| Strategy for Future Research Activity |
1.組織細胞特異的レスキューマウスについては，解析に十分な個体数が揃った段階で（各群10匹程度を想定），通常食を対照として60%高脂肪食摂餌を開始する．32週齢で解剖し，全身p62およびNrf2遺伝子二重欠失マウスと，NASH肝癌についての表現型（個数，大きさ，悪性度，病理学的特徴）を比較解析し，どの組織（臓器）のp62もしくはNrf2が肝癌の発癌進展に重要であるか，あるいはどのように肝癌発生を抑止しているかを明らかにする．
2.ヒト臨床検体について，上記HE，p62，Keap1，LC3Aに加え，更にmulti-ubiquitin, Masson trichromeの免疫染色を行う．また，免疫染色の解析結果と患者情報（病歴，血液検査結果，予後情報）などとの関係性について統計学的手法を用いて解析する．
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[Journal Article] Urinary levels of Titin-N flagment, a skeletal muscle damage maker, are increased in subjects with Nonalcoholic fatty liver disease.2019
Author(s)
Oshida N, Shida T, Oh S, Kim T, Isobe T, Okamoto Y, Kamimaki T, Okada K, Suzuki H, Ariizumi S, Yamamoto M, Shoda J
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Journal Title
Sci Rep
Volume: 9
Pages: 19498
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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