2019 Fiscal Year Annual Research Report
TTC39B標的RNA医薬搭載肝特異的バイオナノカプセルによる脂肪肝炎治療薬開発
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18H03532
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
小関 正博 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (10467582)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
黒田 俊一 大阪大学, 産業科学研究所, 教授 (60263406)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 核酸医薬 / PCSK9 / バイオナノカプセル |
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| Outline of Annual Research Achievements |
RNAiは血中に存在するendonucleaseによる分解により速やかに分解されてしまうため、化学修飾による耐性向上か、ナノキャリア搭載による保護が必要である。今回申請者は、endonuclease耐性が高くなる独自のたんぱく修飾をした核酸作成技術をもつA社と共同研究契約を結び、LDL受容体の発現調節に関与しているPCSK9に対して、マウスのヒトで保存されている配列を選択しRNAiを作成した。Hepa1-6などの細胞株にて、RNAiの配列を選定した。分担研究者の黒田が開発したヒト肝臓特異的DDSナノキャリアであるバイオナノカプセル（Yamada et al. Nature Biotech 2003）に搭載した。バイオナノカプセルはヒト肝臓特異的に感染するB型肝炎ウイルスの表面タンパク質を提示しており、同ウイルス固有の①ヒト免疫系からの回避能、②高効率かつ高特異性のヒト肝臓細胞感染能、③ヒト肝臓細胞内におけるエンドソーム脱出能を有している。しかし、検討の結果、バイオナノカプセルへのA社のRNAiの搭載効率が、十分ではないことがわかった。そのため、別のナノカプセルB、ナノカプセルCを選定し、A社のRNAiの搭載効率を確認したのち、野生型C57Bl/6マウスに対する投与実験を行った。ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与した実験で、肝PSCK9 mRNAのノックダウン効率をqPCR法で評価したところ、約40％程度のノックダウン効率が得られた。また、脂肪肝炎の治療評価の系として、これまでの高脂肪高シュクロース胆汁酸含有食を改変し脂質Xを加えて、新規食事誘導性脂肪肝炎マウスを作成した
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
RNAiは血中に存在するendonucleaseによる分解により速やかに分解されてしまうため、化学修飾による耐性向上か、ナノキャリア搭載による保護が必要である。今回申請者は、endonuclease耐性が高くなる独自のたんぱく修飾をした核酸作成技術をもつA社と共同研究契約を結び、さらにRNAiを運ぶナノキャリアへの搭載を試みた。しかしナノキャリアへのRNAiへの搭載と接種後のRNAiの放出は、相反する点があり、基礎的条件検討に時間を要した。A社作成のRNAiとナノキャリアの相性（電荷、疎水性など）を検討し、最終的にナノカプセルCとの組み合わせを選択した。
並行して、脂肪肝炎の治療評価の系として、これまでの高脂肪高シュクロース胆汁酸含有食を改変し脂質Xを加えた、新規食事誘導性脂肪肝炎マウスを作成することができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
本学の動物実験施設の全面改修が急遽決定され、臨時施設への1.5年間の移動と大幅な飼育ケージの制限がかかったためLDL受容体ノックアウトマウスの入手が困難になった。当面は野生型C57Bl/6マウスに対し、ナノカプセルCに搭載した抗PCSK9-RNAiを投与する群、ナノカプセルCのみを投与する群、RNAiのみを投与する群で、効果の評価を継続することとした。
脂肪肝炎の評価のために、これまでの高脂肪高シュクロース胆汁酸含有食を改変し新規食事誘導性脂肪肝炎マウスモデルを作成したので、PCSK9のRNAiで一定の成果が出たのちに、脂肪肝炎の治療評価の系としてこれまでの高脂肪高シュクロース胆汁酸含有食を改変し脂質Xを加えて作成した新規食事誘導性脂肪肝炎マウスにて、TTC39Bに対するRNAi搭載ナノカプセルについて、野生型C57Bl/6マウスに投与する実験を予定している。
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[Journal Article] Antidiabetic Therapy in the Treatment of Nonalcoholic Steatohepatitis.2020
Author(s)
Sumida Y, Yoneda M, Tokushige K, Kawanaka M, Fujii H, Yoneda M, Imajo K, Takahashi H, Eguchi Y, Ono M, Nozaki Y, Hyogo H, Koseki M, Yoshida Y, Kawaguchi T, Kamada Y, Okanoue T, Nakajima A, Jsg-Nafld JSGON.
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Journal Title
Int J Mol Sci.
Volume: 21
Pages: 1907
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Progranulin deficiency leads to enhanced age-related cardiac hypertrophy through complement C1q-induced β-catenin activation.2020
Author(s)
Zhu Y, Ohama T, Kawase R, Chang J, Inui H, Kanno K, Okada T, Masuda D, Koseki M, Nishida M, Sakata Y, Yamashita S.
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Journal Title
J Mol Cell Cardiol.
Volume: 138
Pages: 197-211
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Rivaroxaban Suppresses the Progression of Ischemic Cardiomyopathy in a Murine Model of Diet-Induced Myocardial Infarction.2019
Author(s)
Liu J, Nishida M, Inui H, Chang J, Zhu Y, Kanno K, Matsuda H, Sairyo M, Okada T, Nakaoka H, Ohama T, Masuda D, Koseki M, Yamashita S, Sakata Y.
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Journal Title
J Atheroscler Thromb.
Volume: 26
Pages: 915-930
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Shotgun proteomic analysis reveals proteome alterations in HDL of patients with cholesteryl ester transfer protein deficiency.2019
Author(s)
Okada T, Ohama T, Takafuji K, Kanno K, Matsuda H, Sairyo M, Zhu Y, Saga A, Kobayashi T, Masuda D, Koseki M, Nishida M, Sakata Y, Yamashita S.
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Journal Title
J Clin Lipidol.
Volume: 13
Pages: 317-325
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] A selective PPARα modulator, pemafibrate reduced hepatic cholesterol content and inflammatory cell infiltration in atherogenic-diet induced steatohepatitis mouse model2020
Author(s)
Kanno K, Koseki M, Saga A, Chang J, Okada T, Inui H, Asaji M, Zhu Y, Ohama T, Nishida M, Yamashita S, Sakata Y.
Organizer
Keystone Symposia 2020
Int'l Joint Research
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[Presentation] Pemafibrate regulate intestinal lipid absorption in diet-induced nonalcoholic steatohepatitis model in mice2019
Author(s)
Kanno K, Koseki M, Saga A, Chang J, Okada T, Inui H, Asaji M, Zhu Y, Ohama T, Nishida M, Yamashita S, Sakata Y.
Organizer
American Heart Association's Scientific Sessions 2019
Int'l Joint Research
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[Presentation] The Predominance of Th1 and Th17 During the Process of Myocardial Infarction in Non-surgical MI model, SR-BI KO/ApoeR61h/h mice2019
Author(s)
Inui H, Nishida M, Asaji M, Saga A, Kanno K , Chang J, Zhu Y , Okada T, Ohama T , Koseki M, Yamashita S, Sakata Y.
Organizer
American Heart Association's Scientific Sessions 2019
Int'l Joint Research
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[Presentation] The effect of dietary oxysterol on steatohepatitis in diabetic mice model2019
Author(s)
Chang J, Koseki M, Saga A, Kanno K, Okada T, Asaji M, Zhu Y, Liu J, Matsuda H, Masuda D, Ohama T, Nishida M, Yamashita S, Sakata Y.
Organizer
第51回日本動脈硬化学会総会・学術集会
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[Presentation] The dietary oxidized cholesterol, 7-ketocholesterol, accelerated steatohepatitis and atherosclerosis in Ldlr deficient mice model2019
Author(s)
Kanno K, Koseki M, Saga A, Chang J, Okada T, Inui H, Asaji M, Zhu Y, Ohama T, Nishida M, Yamashita S, Sakata Y.
Organizer
第3回日本循環器学会基礎研究フォーラム
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[Presentation] The Predominance of Th1 and Th17 During the Process of Myocardial Infarction in Non-surgical MI model, SR-BI KO/ApoeR61h/h mice2019
Author(s)
Inui H, Nishida M, Chang J, Zhu Y, Kanno K, Okada T, Ohama T, Koseki M, Yamashita S, Sakata Y.
Organizer
第3回日本循環器学会基礎研究フォーラム
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[Presentation] The dietary oxysterol accelerated steatohepatitis in ob/ob mice model2019
Author(s)
Chang J, Koseki M, Saga A, Kanno K, Okada T, Inui H, Asaji M, Zhu Y, Ohama T, Nishida M, Yamashita S, Sakata Y.
Organizer
第3回日本循環器学会基礎研究フォーラム
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