2020 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidation of protein networks for the mechanism of carcinogenesis through the oxidoreductase in the endoplasmic reticulum
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18K05329
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
野村 尚生 北海道大学, 薬学研究院, 特任助教 (90597840)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 癌 / ミトコンドリア / 機能解明 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
癌幹細胞を得る手段として、初代培養細胞以外では、多くの研究者は薬剤による耐性獲得細胞株を癌幹細胞として調製しているが、これはあくまでも“薬剤耐性株”であり、真の癌幹細胞なのかはわかっていない。癌幹細胞は通常の癌細胞内にわずかに含まれると考えられる。申請者は複数の手法を組み合わせ、癌細胞株中にごく微量存在する癌幹細胞様細胞を単離することに成功した。申請段階では、微量すぎて培養することが困難であった、乳癌細胞などにおける癌幹細胞様細胞を効率的に培養する手法を開発した。これにより、複数種類の癌幹細胞様細胞を用いて、開発したHE-Iのミトコンドリアにおける機能を解析することが可能となった。加えて、細胞形態、細胞表面タンパク質variant解析などを複合することで、癌幹細胞様細胞の不均一性が明らかとなり、シングルセルとして単離することで、３段階に癌幹細胞様細胞の性質をランク分けし、クローン化を行った。昨年までは、大腸癌細胞株、乳癌細胞株それぞれ１種ずつのみ、完遂されていたが、今年度は乳癌細胞株２種について癌幹細胞株化を完了した。さらなる解析として、低酸素培養を併用しERO1やPDIなどの酸化還元調節酵素、HIF-1などの転写因子に関して発現解析を行なった。さらに、ミトコンドリア解析を行ったところ、癌細胞、癌幹細胞様細胞において、嫌気条件、好気条件でのミトコンドリア挙動に大きな変化がないことが判明した。しかしながら、HE-Iは嫌気条件において、好気条件よりも効果が高いことが判明した。このことから、HE-Iはin vitroよりもin vivoでの効果が高いことを証明していると考えられる。
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Research Products
(1 results)
