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2018 Fiscal Year Research-status Report

リン脂質代謝による植物免疫制御を介した広耐病性の分子機構の解明と病害防除への展開

Research Project

Project/Area Number 18K05651
Research InstitutionKochi University

Principal Investigator

木場 章範  高知大学, 教育研究部総合科学系生命環境医学部門, 教授 (50343314)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 大西 浩平  高知大学, 教育研究部総合科学系生命環境医学部門, 教授 (50211800)
曵地 康史  高知大学, 教育研究部総合科学系生命環境医学部門, 教授 (70291507)
Project Period (FY) 2018-04-01 – 2021-03-31
Keywordsフォスファチジン酸 / 病害抵抗性 / フォスフォリパーゼ / 病害防除
Outline of Annual Research Achievements

申請者らはフォスファチジン酸脱リン酸化酵素(DS1-PAP)の1遺伝子の抑制で、糸状菌・卵菌・細菌・ウイルスに耐病性を示すことを明らかしている(広耐病性と称す)。本計画では、①ゲノム編集で作製したDS1-PAP欠損ベンサミアナ植物(DS1植物)を用いて、広ストレス耐性の分子機構をトランスクリプトーム、メタボローム解析を通して解明すること。②ベンサミアナ植物ゲノムより単離したDS1-PAPプロモーターとレポーター遺伝子(GUS)との融合遺伝子を導入した形質転換植物と病原体エフェクター、植物cDNA、および化合物ライブラリーを利用し、PAP発現を誘導・抑制するエフェクター、植物cDNA、化合物を選抜する。③in vitroでのDS1-PAP活性を指標に活性化・阻害剤の選抜を行う。DS1-PAPを標的にした広耐病性機構・DS1-PAP発現・DS1-PAP活性阻害剤を利用した、新奇防除法の確立につながる基礎研究を目的にしている。
今年度はDS1-PAP欠損ベンサミアナ植物(DS1植物)をゲノム編集で作製することを行った。ゲノムDNAを鋳型にしたダイレクトシークエンス解析から、変異株の候補を4系統の候補株を得ることができた。また、ベンサミアナ植物ゲノムより単離したDS1-PAPプロモーターとレポーター遺伝子(GUS)との融合遺伝子を導入した形質転換植物の作出も行った。カナマイシン耐性を指標に選抜を行い、10系統のカナマイシン抵抗性株を得ることができた。それぞれのT1種子を播種したカナマイシン耐性株のゲノムDNAを鋳型にNPTII遺伝子の有無で組み換え体の選抜を行い、10系統全てが組み換え体であることが確認できた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

DS1-PAP欠損ベンサミアナ植物(DS1植物)を4系統の候補株を得ることができた。また、ベンサミアナ植物ゲノムより単離したDS1-PAPプロモーターとレポーター遺伝子(GUS)との融合遺伝子を導入した形質転換植物の作出も行うことができたことから、概ね予定通り研究が進んでいると判断した。

Strategy for Future Research Activity

今後はゲノム編集で作製したDS1-PAP欠損ベンサミアナ植物(DS1植物)4系統の候補株から、完全に欠損した植物をスクリーニングする。また、ベンサミアナ植物ゲノムより単離したDS1-PAPプロモーターとレポーター遺伝子(GUS)との融合遺伝子を導入した形質転換植物に関して、ホモ個体を選抜し解析へと進める。さらに、in vitroでのDS1-PAP活性を簡易的・高感度で検出する実験系の構築を進める。

Causes of Carryover

前年度は実験材料の作出が主な内容であったため、解析に使用予定の予算が一部残る結果となった。次年度は解析作業が中心となるため、そのための消耗品等に使用する。

  • Research Products

    (8 results)

All 2018

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results,  Open Access: 5 results) Presentation (3 results) (of which Invited: 3 results)

  • [Journal Article] The SEC14 phospholipid transfer protein regulates pathogen-associated molecular pattern-triggered immunity in Nicotiana benthamiana.2018

    • Author(s)
      Akinori Kiba, Masahito Nakanoa, Kouhei Ohnishi, Yasufumi Hikichi
    • Journal Title

      Plant Physiology and Biochemistry

      Volume: 125 Pages: 212-218

    • DOI

      doi: 10.1016/j.plaphy.2018.02.002.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Ralfuranones contribute to mushroom-type biofilm formation by Ralstonia solanacearum strain OE1-12018

    • Author(s)
      Mori Y., Hosoi Y., Ishikawa S., Hayashi K., Asai Y., Ohnishi H., Shimatani M., Inoue K., Ikeda K., Nakayashiki H., Nishimura Y., Ohnishi K., Kiba A., Kai K., Hikichi Y.
    • Journal Title

      Molecular Plant Pathology

      Volume: 19 Pages: 975-985

    • DOI

      doi: 10.1111/mpp.12583.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Involvement of avirulence genes avrA and popP1 of Japanese Ralstonia solanacearum strains in the pathogenicity to tobacco2018

    • Author(s)
      Chen Li、Dahal Amol、Zhang Yong、Rokunuzzaman Md、Kiba Akinori、Hikichi Yasufumi、Ohnishi Kouhei
    • Journal Title

      Physiological and Molecular Plant Pathology

      Volume: 102 Pages: 154~162

    • DOI

      https://doi.org/10.1016/j.pmpp.2017.12.007

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Involvement of ralfuranones in the quorum sensing signalling pathway and virulence of Ralstonia solanacearum strain OE1-12018

    • Author(s)
      Mori Y., Ishikawa S., Ohnishi H., Shimatani M., Morikawa Y., Hayashi K., Ohnishi K., Kiba A., Kai K., Hikichi Y.
    • Journal Title

      Molecular Plant Pathology

      Volume: 19 Pages: 454-463

    • DOI

      https://doi.org/10.1111/mpp.12537

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Contribution of a lectin, LecM, to the quorum sensing signalling pathway of Ralstonia solanacearum strain OE1-12018

    • Author(s)
      Hayashi Kazusa、Kai Kenji、Mori Yuka、Ishikawa Shiho、Ujita Yumeto、Ohnishi Kouhei、Kiba Akinori、Hikichi Yasufumi
    • Journal Title

      Molecular Plant Pathology

      Volume: 20 Pages: 334~345

    • DOI

      https://doi.org/10.1111/mpp.12757

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] リン脂質代謝による植物免疫の制御2018

    • Author(s)
      木場章範・中野真人・大西浩平・曵地康史
    • Organizer
      平成30年度植物感染生理談話会
    • Invited
  • [Presentation] Nicotiana benthamiana植物由来ホスフォリパーゼC3は過敏感反応を抑制する2018

    • Author(s)
      高里詩織・大西浩平・曵地康史・木場章範
    • Organizer
      平成30年度日本植物脂質科学シンポジウム
    • Invited
  • [Presentation] Nicotiana benthamiana 植物においてホスホリパーゼCδは基礎的抵抗性の誘導に関与する2018

    • Author(s)
      髙安 範・大西 浩平・曵地 康史・木場 章範
    • Organizer
      平成30年度日本植物脂質科学シンポジウム
    • Invited

URL: 

Published: 2019-12-27  

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