2018 Fiscal Year Research-status Report
運動性乳酸菌の選択分離に向けた基盤構築とその応用：植物防除への新展開
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18K05923
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| Research Institution | University of Yamanashi |
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Principal Investigator |
乙黒 美彩 山梨大学, 大学院総合研究部, 准教授 (20635099)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 運動性乳酸菌 / ワイン醪 / Lactobacillus nagellii / 走化性 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
乳酸菌は一般的な性質として運動性を有しない微生物とされてきた。近年、動物消化管、ココアなどの発酵食品、ワインや焼酎などの発酵もろみから鞭毛による運動性を有する乳酸菌の分離が報告されている。運動性乳酸菌の研究開発および産業利用はほとんど行われていない状況である。この一因として、運動性乳酸菌の効率的な分離法が確立されていないことが考えられる。そこで、本研究では、毛細管捕集法を利用した運動性乳酸菌の分離技術の開発を目指した。
【選択分離法の開発】運動性既知の基準株である L. nagelii JCM 12492T および L. ghanensis JCM 15611T を用いて、9 種類の試験化合物に対する走化性を試験した。L. nagelii JCM 12492T においては フェネチルアルコール水溶液、L. ghanensis JCM 15611T においてはYeast Extract 水溶液に明確な化学走性 (p<0.05) を示した。この2種の試験化合物を誘引剤として使用し、シャルドネブドウ果汁 (Sample No. 18MFCH2) から毛細管捕集法にて運動性乳酸菌の分離を行い、分離率を調査した。対照区の希釈平板法に比べて、フェネチルアルコール水溶液を誘引剤とした試験区は運動性乳酸菌分離率が向上 (p<0.05) した。以上より、運動性乳酸菌は菌種ごとに化学走性を示す物質が異なることが示唆され、生息環境に存在する物質が影響していることが考えられた。そのため、分離源によって誘引剤を選択することで、運動性乳酸菌分離率の向上に繋がる可能性が示唆された。
【有用性評価試験方法の検討】分離株の農業への展開を視野に有用性・応用性を評価するため、乳酸菌とジャガイモ疫病菌（Phytophthora infestans）を用いた試験法を確立した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
乳酸菌の化学走性に関する誘引剤の検討を行い、フェネチルアルコールおよびYeast Extract 水溶液に効果があることを実証した。さらに、ワイン発酵もろみから運動性乳酸菌を14株分離することができた。本年度の数値目標としては30株を取得することで、目標値には届かなかったが、L. nageliiを効率よく分離する方法が確立できた。また、一部分離株がジャガイモ疫病菌Phytophthora infestansの生育を緩慢にすることも見出しており、当初の予定したとおり研究が進められている。
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| Strategy for Future Research Activity |
毛細管捕集法で分離した乳酸菌の運動性発現条件を検討するとともに、分離頻度が少ない乳酸菌群については新たな誘引剤の検討を行い、分離法の改良を目指す。一方、自然環境中から分離した乳酸菌株のバクテリオシン生産性を調査し、植物病原菌であるブドウべと病やジャガイモ疫病菌に効果のある乳酸菌のスクリーニングも併せて進めていく。
具体的には、L. nagelii JCM 12492T および L. ghanensis JCM 15611T以外の運動性乳酸菌既知株（L. satsumensis JCM 12392T, L. vini JCM 14280T, L. mali NBRC 102159T）に対して効果のある誘引剤を調査することにより、運動性乳酸菌全般に効果のある誘引剤を調査する。また、分離効率を向上さるため、細胞の走化性試験に利用されているポアサイズ3~8μmのメンブレンインサート使用した方法についても検討する。毛細管捕集法により分離保存した乳酸菌株についてはバクテリオシン生産性について調査する予定である。
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Research Products
(1 results)
