2018 Fiscal Year Research-status Report
犬の骨髄疾患におけるクローン性の検出および原因遺伝子変異の探索
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18K05967
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
越野 裕子 (後藤裕子) 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 特任准教授 (80436518)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 真性多血症 / クローン性 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. XCIP解析法の改良
犬におけるX染色体不活化パターン (XCIP) 解析の対象症例を増やすために、これまで用いていたandrogen receptor (AR) 遺伝子上の2箇所のリピート部位に加え、さらにSLIT and NTRK-like family member 4 (SLITRK4) 遺伝子上の2箇所のリピート部位を加えた解析方法を構築した。この方法によりメス個体の83%が解析可能となり、57%が解析可能であったこれまでのAR遺伝子のみを用いた方法と比較して大幅に解析可能個体を増やすことに成功した。研究成果は現在投稿中である。
2. 網羅的解析に供するPV症例サンプルの収集
真性多血症 (PV) と診断された2頭の雌犬について末梢血サンプルを得ることができた。これら2例のうち、1例についてはXCIP解析によりクローン性が示され、1例についてはXCIP解析が不可能であった。それぞれの症例の末梢血単核球を、抗CD3モノクローナル抗体と磁気ビーズを用いてCD3陽性Tリンパ球（正常細胞群）とCD3陰性有核細胞（異常クローンを含む細胞群）の2群に分離した。それぞれの症例について2細胞群からゲノムDNAを抽出し、エクソーム解析の準備を行なっている。今後はエクソーム解析により正常細胞群と異常クローンを含む細胞群の遺伝子配列を網羅的に比較し、PVの病因となる遺伝子変異の探索を行うものとする。
3. 候補遺伝子の検証対象となるPV症例サンプルの収集
上記エクソーム解析で得られた候補遺伝子変異を検証するPV症例の末梢血サンプルの収集を継続中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
概ね予定通り網羅的解析のサンプルを準備することができた。しかし、特にCD3陽性Tリンパ球群から抽出されたゲノムDNA量が想定より少なかったことから、予定していたエクソーム解析を行うことができるかどうか不明である。ゲノムDNAのクオリティーや量に問題があった場合には、別の手法を検討する予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
まずは、抽出されたゲノムDNAのクオリティーと量のチェックを行う予定である。クオリティー、量ともにエクソーム解析を行うにあたり十分であった場合には、予定通り解析を進めることとする。エクソーム解析が難しかった場合には、ターゲットリシーケンス等の代替案を検討する。
網羅的解析で得られた候補遺伝子については、他症例を用いたサンガーシーケンスによる検証が必要であるため、PV症例の末梢血サンプルは引き続き収集していく予定である。
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