2020 Fiscal Year Annual Research Report
Basic reserch for quality management of canine mesenchymal stem cells
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18K05990
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| Research Institution | Tokyo University of Agriculture and Technology |
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Principal Investigator |
新井 克彦 東京農工大学, 農学部, 教授 (60175940)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | イヌ / 間葉系幹細胞 / CD73 / CD90 / CD105 / 血管内皮細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
間葉系幹細胞（MSC）移植を基盤とした再生医療では、用いるMSCの品質を管理することが重要であり、ヒト再生医療領域においては、①培養シャーレへの接着性を有する、②骨、軟骨、脂肪への分化能を有するおよび③CD73、CD90、CD105を発現すること、が必須条件とされている。一方、イヌにおいてはこれら３種のCDがMSCの細胞表面マーカーとなるかどうかは明らかになっておらず、また市販抗体の多くはヒトやマウスに対するもので、イヌCDに対する反応性も明らかにされていない。そこで、イヌCD73、CD90およびCD105に反応するモノクローナル抗体（MAb）を作製し、イヌ脂肪由来MSCに対する反応性を検索することを目的とした。
イヌcDNAデータベースより得たイヌCD73/CD90/CD105に対応する細胞外領域の5’末端を、イヌ脳cDNAを鋳型としてRT-PCRにより増幅した。特異的プライマーにより増幅された各CDに対応するcDNAをpETite N-His SUMO Kan Vectorにクローニングし、大腸菌BL21(DE3)にトランスフォームした後にIPTG存在下で融合タンパク質を誘導した。モノクローナル抗体（MAb）はHis SUMO-tagをSUMOプロテアーゼで切断・除去した組換えタンパク質を抗原としマウスに免疫することで樹立した。各CDを認識するMAbを用いたフローサイトメトリーを、培養脂肪由来イヌMSCに供した。
その結果、抗イヌCD73抗体が3クローン、抗イヌCD90抗体が3クローン、抗イヌCD105抗体が4クローン樹立できた。各CDに対するMabを用いてイヌMSCについてフローサイトメーター解析を行ったところ、CD105については陽性反応が見られた。さらに培養イヌ血管内皮細胞においてCD105の発現が明らかとなった。
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[Journal Article] Incubation and water temperatures influence the performances of loggerhead sea turtle hatchlings during the dispersal phase.2020
Author(s)
Kobayashi, S, Aokura, N, Fujimoto, R, Mori, Kumazawa, Y, Ando, Y, Matsuda, T, Nitto, H, Arai, K, Watanabe G.
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 8
Pages: 1-8
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Gold nanoparticle-adjuvanted S protein induces a strong antigen-specific IgG response against severe acute respiratory syndrome-related coronavirus infection, but fails to induce protective antibodies and limit eosinophilic infiltration in lungs.2020
Author(s)
Sekimukai H, Iwata-Yoshikawa N, Fukushi S, Tani H, Kataoka M, Suzuki T, Hasegawa H, Niikura K, Arai K, Nagata N.
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Journal Title
Microbiol Immunol.
Volume: 64
Pages: 33-51
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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