2018 Fiscal Year Research-status Report
Development of MODY5 model mouse using blastocyst complementation
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18K06044
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| Research Institution | Central Institute for Experimental Animals |
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Principal Investigator |
橋本 晴夫 公益財団法人実験動物中央研究所, 教育・研修室, 研究員 (30353478)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
外丸 祐介 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 教授 (90309352)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 胚盤胞補完法 / HNF-1β / shRNA / 腎臓 / 膵臓 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
HNF-1betaの遺伝子発現を70%以上抑制するshRNAベクターを3種類構築した。さらに東京農工大学からHNF-1betaの遺伝子発現を70%以上抑制するshRNAベクターを持つマウスES細胞を譲渡して頂いた。今後、GFP発現ベクターを、そのES細胞に導入しドナー細胞のマーカーとする。
その一方で、腎臓欠損であるSall1ノックアウトマウスの受精卵の蓄積に向けた動物生産を行っている。具体的には熊本大学CARDから導入したSall1ノックアウトマウス精子をC57BL/6Jと体外受精し、個体作製した。その後、IQI/Jic系統と戻し交配を行い現在N5でヘテロの増産を行っている。
膵臓欠損であるPDX-1ノックアウトマウスは、実中研で開発したものが前回の科研費の実験で凍結保存卵を使い切ってしまったため、熊本大CARDからの導入を試みたが、不調におわった。従って、広島大学にてゲノム編集により作製を開始した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
PDX-1ノックアウトマウスが熊本大から入手できなかったが、現在ゲノム編集により作製中であり、既に胚移植を終えている。あと2年で十分にインジェクションに持って行けるスケジュールである。従って、おおむね順調である。
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| Strategy for Future Research Activity |
ES細胞については、東京農工大から譲渡されたshRNA-ES細胞への蛍光マーカーの導入と3種類のshRNAベクターのES細胞への導入を行う。
Sall1ノックアウトマウスについては、ヘテロ同士の受精卵の蓄積を行う。PDX-1ノックアウトマウスは開発を継続し、年末から受精卵の蓄積作業に移る。
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| Causes of Carryover |
30年度の研究費で残額が生じたが、35,745円は軽微であり、30年度の計画は順調であった。その残額は、31年度では培地などの消耗品に充当される。
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Research Products
(6 results)
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[Journal Article] Sox17 is essential for proper formation of the marginal zone of extraembryonic endoderm adjacent to a developing mouse placental disk..2018
Author(s)
Hitomi IGARASHI, Mami UEMURA, Ryuji HIRAMATSU, Ryuto HIRAMATSU, Saki SEGAMI, Montri PATTARAPANAWAN, Yoshikazu HIRATE, Yuki YOSHIMURA, Haruo HASHIMOTO, Hiroki HIGASHIYAMA, Hiroyuki SUMITOMO, Masamichi KUROHMARU, Yukio SAIJOH, Hiroshi SUEMIZU, Masami KANAI-AZUMA, Yoshiakira KANAI.
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Journal Title
Biology of Reproduction
Volume: 99 (3)
Pages: 578-589
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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