2020 Fiscal Year Annual Research Report
Structural study of infection molecular mechanism of the mouse norovirus.
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18K06091
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
水谷 健二 横浜市立大学, 生命医科学研究科, 助教 (10525570)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | マウスノロウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ノロウイルスは、急性胃腸炎の主要因となるウイルスである。本研究ではマウスに感染する近縁のウイルスであるマウスノロウイルスの感染受容体であるＣＤ３００ｌｆおよびＣＤ３００ｌｄとキャプシドタンパク質ＶＰ１の相互作用を明らかにするために複合体の結晶構造解析を目指して当初は研究を進めていた。他の研究グループによりＶＰ１・ＣＤ３００ｌｆ複合体の立体構造が報告されたため、ＣＤ３００ｌｆの立体構造解析に関しては優先度を下げ、ＣＤ３００ｌｄを中心に研究を進めた。発現条件の検討や培養スケールの拡大により相互作用解析と結晶化にたる量のサンプルが得られた。プルダウンアッセイとゲルろかクロマトグラフィーによりＶＰ１とＣＤ３００ｌｄとの相互作用が確認できたため共結晶化のスクリーニングを行なった。市販のスクリーニングキットで約７００種のバッファー条件を試したが結晶は得られなかった。コンストラクティングの際のＮ末端およびC末端の処理に原因があると考え、コンストラクトの検討を行なっている。またＶＰ１と相互作用する分子の候補であるリゾチームフラグメントとＶＰ１の共結晶化スクリーニングでも結晶化スクリーニングを行なった。いくつかの条件で結晶が出たため条件の精密化を行っている。同時にＶＰ１との相互作用する分子として胆汁酸との共結晶化を試みた。またＶＰ２タンパク質についても様々なコンストラクトで調製したサンプルについて結晶化スクリーニングや分析超遠心による相互作用解析を行なった。
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