2021 Fiscal Year Annual Research Report
Characterization of structure dependent CAPN7 activity
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18K06236
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science |
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Principal Investigator |
小野 弥子 公益財団法人東京都医学総合研究所, 基礎医科学研究分野, 副参事研究員 (20392376)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | プロテアーゼ / 相互作用タンパク質 / プロテアーゼ複合体 / ドメイン構造 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
カルパイン7のプロテアーゼ活性検出が可能な発現系の検討、及び、新規結合タンパク質との関係性解析を継続した。また、ノックインマウスでの矮小化を解析するための実験条件などを検討した。
1) これまでに作製したカルパイン7欠失変異体の発現コンストラクトについて、可溶性画分への回収が可能となる大腸菌や培養条件がいくつか絞られた。
2) BioIDにより同定したカルパイン7の結合タンパク質との相互作用を、共発現により検討したが、これまでにポジティブな結果が得られていない。
3)カルパイン7に近い構造を持つカルパイン10のドメイン構造解析を並行して行い、プロテアーゼ活性もしくは基質の嗜好性に関わる可能性を明らかにした。これら2種類のカルパインについて、共に進化的に広く保存されていることから、共通したドメイン構造の機能について、今後も解析を進めることで有意義な情報が得られると考えられる。
最終年度に予定していた実験を行った後、再検討が必要だと判断される結果が得られたため、達成できなかった目標がいくつか残る。共同研究によりカルパイン7ノックアウト細胞での実験系開発を進めて、今後の解析法確立に役立てたい。また、カルパイン10との比較解析によって、これまで機能が分かっていなかったカルパイン7のC末端領域での保存性の意義や、相互作用タンパク質の同定を優先的に行う。また、ノックインマウスより、いくつかの細胞種について初代培養系を確立する準備を進めている。
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