2021 Fiscal Year Annual Research Report
A genome-wide RNAi screen to identify genes involved in the incorporation of antisense oligonucleotides into the cells
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18K06811
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| Research Institution | National Institute of Health Sciences |
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Principal Investigator |
井上 貴雄 国立医薬品食品衛生研究所, 遺伝子医薬部, 部長 (50361605)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 核酸医薬品 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年、アンチセンスやsiRNAに代表される核酸医薬品の開発が進展しており、治療法のない遺伝性疾患や難治性疾患に対する次世代医薬品として注目を集めている。現状では、アンチセンス医薬を中心に15品目の核酸医薬品が上市されているが、その潜在的な課題として細胞内への送達効率が低い点が指摘されている。この課題に対して、オリゴ核酸を構成する核酸の化学修飾、オリゴ核酸の末端の修飾（脂質、糖などの付加）、送達キャリアの活用など、膜あるいは膜タンパク質との親和性を高める試みが行われているが、実用化の観点から更なる技術革新が望まれている。
我々はこれまでに、アンチセンスの細胞内取り込みに関与する遺伝子を探索するために、「GFP発現細胞に対してGFP RNAを分解するRNA分解型アンチセンスを添加し、GFP蛍光をモニターするアッセイ系」と「スプライシング制御型アンチセンス(SSO)を用いたジストロフィン遺伝子の特定のエクソンのスプライスアウトを検出する系」の2種類のスクリーニング系を構築し、候補遺伝子群を特定してきた。
本年度は特定した補遺伝子群の中から、膜タンパク質や細胞内輸送に関連するタンパク質など細胞内取り込みに関与する可能性のあると思われる遺伝子を選定し、遺伝子破壊株を樹立した。CRISPR-Cas9システムを用いたゲノム編集を行い、10数遺伝子について破壊株の作製を完了し、性状解析を行った。RNA分解型アンチセンスの効果を解析した結果、複数の遺伝子破壊株において、アンチセンスの有効性の顕著な低下が確認された。
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