2018 Fiscal Year Research-status Report
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18K06820
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
柴田 俊一 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 教授 (80187400)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
船戸 紀子 東京医科歯科大学, 統合研究機構, 准教授 (10376767)
依田 浩子 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (60293213)
藤川 芳織 昭和大学, 歯学部, 助教 (60805943)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 下顎頭軟骨 / 成長因子 / 遺伝子発現 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
2018年度はまず研究の骨子として申請書にある「初期下顎頭軟骨形成を制御する候補分子の網羅的検索」を行うため、マイクロアレイ解析を行った。マウス下顎頭軟骨形成に関連するSox9発現前のE13.0日と発現後のE14.0の下顎頭軟骨原基からTotal RNAを抽出し、GeneArray Mouse 2.0STを用いてE14.0で2倍以上発現している遺伝子、1/2以下に減少している遺伝子をそれぞれ同定した。
ピックアップした遺伝子のうち特に成長因子やそのレセプターに関係するもの、骨、軟骨形成に関与するもの、あるいは細胞外基質成分に相当するものに焦点を当て候補分子の絞り込みを行った。その結果IGFBP famiryの一分子や、カルシトニン関連タンパクあるいはMMP-9等など6分子がE14.0で2倍以上発現している事が明らかとなり、これらを候補遺伝子として次年時以降さらなる解析を行う事とした。
また候補分子としてもピックアップされたMMP-9を含む数種のMMPおよびそのインヒビターであるTIMP-1,-2,-3の初期下顎頭軟骨形成部位における発現を in situ hybridizationおよびReal Time PCRで検討したところ、MMP-2とTIMP-2が下顎頭軟骨の軟骨膜の外層、MMP-14とTIMP-1はその内層に強く発現する事がわかり、これらの分子が初期化学等軟骨形成に深く関連している事が明らかになった。またMMP-9はおもに破骨細胞に発現が認められ、軟骨形成後のモデリングに関連する事が分かった。これらの結果は大学院生の学位論文として投稿、一部改定後出版された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究の骨子となる「初期下顎頭軟骨形成を制御する候補分子の網羅的検索」を行うためのマイクロアレイ解析を実行し、候補分子の絞り込みを行って次年時以降の解析に道筋がついた。また候補分子にも含まれるMMPの発現に関するデータがまとまり、論文を出版する事が出来た。以上のことから実験計画は概ね順調に伸展していると判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度の解析から絞られた候補分子をさらにReal time PCRとin situ hybridizationで解析し、候補分子の下顎頭軟骨形成への役割をより明確にする。その後、下顎頭軟骨の器官培養系をもちいてsiRNAあるいはアンチセンスオリゴ法により、候補遺伝子の機能解析を行う予定となっている。
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| Causes of Carryover |
研究の骨子となるマイクロアレイ解析が予定より安価で済んだ事と、講座研究費で消耗品等をかなり補充できた事で次年度使用額が生じた。次年度は候補遺伝子の更なる解析のほかサンプル採取時期を変更した再度のマイクロアレイ解析も計画している。
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