2018 Fiscal Year Research-status Report
コレクチン複合体CL-LKが3MC症候群の病態に与える影響とその分子基盤の解明
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18K06947
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Research Institution | Asahikawa Medical College |
Principal Investigator |
松田 泰幸 旭川医科大学, 医学部, 助教 (10532252)
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Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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Keywords | コレクチン / 3MC症候群 / 発生 / 自然免疫 |
Outline of Annual Research Achievements |
CL-K1は、自然免疫機能を有することが明らかにされているカルシウム要求性のレクチンである。近年、ヒトの形態形成に異常をきたす遺伝病(3MC症候群)の患者からコレクチンCL-K1の遺伝的変異が報告された。このことからCL-K1が自然免疫機能だけでなく、個体発生および成長発育に関与する可能性が示唆されている。また、CL-K1が別のコレクチンCL-L1とヘテロ複合体を形成していることを明らかにしたが、詳細な分子機構は未だ不明である。本研究では、3MC症候群の治療法確立の可能性を模索するため、これまで自然免疫分子として捉えられてきたCL-K1およびCL-L1の新規機能(個体発生および成長発育)に関する知見を得ることを目的としている。 初年度である平成30年度は、CL-K1およびCL-L1と相互作用する新たな未知分子を探索する目的として、CL-K1およびCL-L1の発現コンストラクトの作製を行った。精製がスムーズに進むよう、全長のCL-K1およびCL-L1にHisタグやFLAGタグなどの精製タグを付加した様々なバリエーションの発現コンストラクトを設計、作製した。また、CL-K1とCL-K1のヘテロ複合体であるCL-LKを効率的に発現、精製するため、2種類のタンパク質を同時発現可能なベクターを利用して、CL-K1およびCL-L1を組み込んだプラスミドを作製した。今後は、これらの発現コンストラクトの中から、発現精製、検出の効率が最も良いものを選択し、相互作用解析等の実験に用いていく予定である。また、必要なときにいつでも細胞培養を開始しタンパク質発現ができるように、発現に使用する細胞株の培養、液体窒素保存を行った。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
CL-K1およびCL-L1の様々な発現コンストラクトの作製を予定通り完了することができた。
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Strategy for Future Research Activity |
作製したCL-K1およびCL-L1の発現コンストラクトの中から、発現精製、検出の効率が最も良いものを選択し、CL-K1、CL-L1タンパク質の精製を目指す。また、CL-K1およびCL-L1がうまく得られた場合、これらを利用してCL-K1やCL-L1と相互作用する未知分子の同定を目指す。
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Causes of Carryover |
当初購入を予定していたコンストラクト作製にかかる試薬の購入費が想定していたよりも少なく済んだため。また、学会参加費、旅費が不要であった。次年度以降のタンパク質発現や相互作用解析等にかかる費用に使用させていただきます。
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