L-type amino acid transporter 1(LAT1) as a molecular target for chemotherapy against bile duct carcinoma

2021 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18K07001
• Research Institution: St. Marianna University School of Medicine
• Principal Investigator: 柳澤 信之 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 准教授 (80337914)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: LAT1 / アミノ酸トランスポーター / 胆道癌

Outline of Annual Research Achievements

L-type amino acid transporter 1（LAT1、SLC7A5）はがん特異的に発現していることから、がん型アミノ酸トランスポーターと考えられ、がん診断のみならず予後バイオマーカー・治療標的分子として注目されてきている。我々は胆管癌・膵癌において正常上皮よりもLAT1が発現亢進し、その高発現は独立した 有意な予後不良因子であることを報告した（Yanagisawa N. et al., Cancer Med., 2014ほか）。LAT1高発現で新規阻害薬JPH203での効果が期待され、かつ悪性度の高い胆道癌細胞株について、LAT1機能解析・新規LAT1選択的阻害薬JPH203に対する腫瘍抑制効果の検討を行い、LAT1阻害薬によるがん治療効果等、臨床応用のための基礎的データを収集する。 今回、ヒト胆道癌細胞株（HuCCT1・TFK1・HuH28・G415）を使用し、各細胞株において、１）各々の 細胞増殖能を検討した。２）ホルマリン固定パラフィン包埋cell block切片を用いた免疫染色、３）Real time RT-PCR、４）western blottingでLAT1・LAT2の発現を確認した。これらの結果からTFK1がLAT1の細胞膜高発現・良好な細胞増殖能を示したためTFK1を選択し、５）siRNAによるLAT1のknock down実験６）LAT1阻害薬JPH203とゲムシタビンの細胞増殖抑制効果について検討した。siRNAによってwestern blottingで一時的なタンパク発現低下を確認した。ゲムシタビンは想定通りの細胞増殖抑制を示し、またJPH203もゲムシタビンと比較して弱いが細胞増殖抑制を認めた。７）レンチウイルスベクターを用いたshRNAによるLAT1 knokcdown細胞株を複数作製した。発現低下を確認し現在実験継続中である。