2019 Fiscal Year Research-status Report
Role of lysosome-resident amino acid transporters in inflammatory response
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18K07056
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| Research Institution | National Center for Global Health and Medicine |
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Principal Investigator |
小林 俊彦 国立研究開発法人国立国際医療研究センター, その他部局等, 副プロジェクト長 (40613203)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | リソソーム / 炎症応答 / アミノ酸トランスポーター |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、リソソーム局在アミノ酸トランスポーターSLC15A3を介した新規炎症シグナルの制御機構、および慢性炎症疾患の病態制御における役割の解明を目的として行っている。本年度は(1) SLC15A3による炎症制御機構の解析、(2)炎症応答におけるSLC15A3発現細胞の同定について解析を進め、(3) SLC15A3会合分子の探索を行った。(1) SLC15A3による炎症制御機構の解析：TMPDの腹腔内投与によってもたらされるびまん性肺出血と貧血を伴う持続的な炎症モデルにおいて、SLC15A3欠損マウスでは、TMPDによって誘導される肺出血の病態が著しく改善されることを見出し、それに伴って肺胞洗浄液中のIL-10量が増加、IL-6量が低下していることが明らかとなった。また骨髄キメラを作成し、この表現型が血液細胞のSLC15A3欠損によってもたらされることを明らかとした。(2) 炎症応答におけるSLC15A3発現細胞の同定：TMPD投与によって腹腔内に浸潤してくる炎症細胞のうち炎症性単球や好中球においてSlc15a3が高い発現をしていることが明らかとなった。抗Gr-1抗体投与による好中球の除去を試みた結果、好中球は炎症病態の改善に寄与することを示唆する結果を得た。(3) SLC15A3会合分子の探索：ビオチンタグ法(Bio-ID法)を改良した手法を用いてSLC15A3相互作用分子を網羅的に同定するための細胞の樹立を完了し、共同研究により質量分析(LC-MS/MS)を用いて会合分子を同定し、パスウェイ解析を行なった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度も、炎症応答におけるSLC15A3の役割の解析を中心に行った。TMPDの腹腔内投与によってもたらされるびまん性肺出血と貧血を伴う持続的な炎症モデルにおいて、SLC15A3欠損マウスでは、TMPDによって誘導される肺出血の病態が著しく改善されること、造血系細胞が大きな役割を担っていることを見出した。これらの成果をまとめ、学会発表（国内）を行った。SLC15A3会合分子の同定については、Bio-ID法での網羅的解析を終了し、同定した会合分子の解析を進めている状況にある。また抗SLC15A3モノクローナル抗体の樹立については、抗ヒトSLC15A3抗体の樹立に成功した。現在、論文投稿のための準備を進めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
TMPD肺炎症モデルにおいて炎症部位に浸潤するSlc15a3陽性の細胞種のうち、好中球以外の細胞種についても細胞種特異的な抗体の投与による除去を行い、炎症病態の改善／増悪を解析することで責任細胞を絞り込んでいく。また、他の炎症・疾患モデルを用いて炎症の惹起あるいは収束におけるSLC15A3の役割を検証する。SLC15A3依存的な炎症制御因子の探索を目的としたSLC15A3会合分子の探索については、網羅的な解析結果を元にした会合分子群のクラスター化を行い、絞り込んだターゲット分子についてCRISPR/Cas9を用いてKOを作成し、炎症応答について検討する。解析ツールとしての抗マウスSLC15A3抗体樹立についても随時KOマウスに免疫を行い、クローン獲得を目指す。個体の病態形成におけるSLC15A3の役割が明らかとなってきたため、SLC15A3による病態形成のメカニズムについて論文化を進める。
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