2018 Fiscal Year Research-status Report

Role of PYCARD, an apoptosis-inducing gene, in prostatic tumorigenesis

Research Project

Project/Area Number	18K07061
Research Institution	Tohoku University
Principal Investigator	福重真一東北大学, 医学系研究科, 准教授 (90192723)
Project Period (FY)	2018-04-01 – 2021-03-31
Keywords	癌 / ゲノム / 遺伝子 / 前立腺癌 / PYCARD / DNAメチル化 / モデルマウス / アポトーシス
Outline of Annual Research Achievements	本研究では、前立腺癌において高頻度メチル化異常を示すPYCARD遺伝子の役割を明らかにすることを目的として、前立腺癌モデルマウスとPycardノックアウトマウスを掛け合わせ、前立腺癌の発生・進展における影響を調べる。また、ヒト前立腺癌組織の免疫染色やRNA in situ ハイブリダイゼーションを用い、PYCARD不活化の時期、臨床病理学的因子との関連を詳細に調べる。平成３０年度は、前立腺癌モデルマウスの作製をおこなうため、Ptenflox/floxマウス凍結精子を理化学研究所バイオリソース研究センターより、また、前立腺特異的Cre発現マウス（PB-Cre4）凍結受精卵をアメリカNCIマウスレポジトリより入手した。また、Pycardノックアウトマウスをがん研究会がん研究所より入手し、飼育を開始した。一方、DNAメチル化とPYCARD蛋白発現の関係を知るため、マイクロダイセクションを実施した前立腺癌５１症例のパラフィン包埋切片を用いてPYCARD蛋白の免疫染色をおこなった。マイクロダイセクションしたサンプルでは、腫瘍部と近傍正常部を抽出し、PYCARDプロモーター領域のメチル化特異的PCR（MSP）法をおこない、約９０％（４６／５１）という高率で癌特異的メチル化を検出した。免疫染色の結果は、DNAメチル化解析の結果を非常によく反映しており、PYCARDは近傍正常部の前立腺基底細胞または分泌細胞で発現し、腫瘍部で発現を失うことが明らかとなった。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 実験に必要なマウスをすべて入手し、免疫染色も適正な実験条件を得ることに成功したので。
Strategy for Future Research Activity	Ptenflox/floxマウス凍結精子、PB-Cre4マウス凍結受精卵については個体復元をおこない、Pycardノックアウトマウスとの掛け合わせによって前立腺特異的なPten-／Pycard-マウスを作製し、Pten-／Pycard+マウスとの比較によってHGPIN（High-grade prostatic intraepithelial neoplasia）や前立腺癌の発生時期、腫瘍径の違いなどに焦点を当て解析していく。また、PYCARDの免疫染色については、マイクロダイセクションした組織が悪性度を示すグリソンスコアが3+4あるいはそれ以上の比較的大きな腫瘍であったため、グリソンスコア3+3あるいは、それ以下の症例や前癌病変HGPINを含む症例についても解析を進めていく。
Causes of Carryover	消耗品購入に際し、キャンペーンにより若干余剰が生じたため。免疫染色等で使用する消耗品に使用する予定である。