Hippoパスウェイをターゲットとした腎癌悪性化モデルマウスの作製と治療応用

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 18K07070
• Research Institution: Oita University
• Principal Investigator: 松浦 恵子 大分大学, 医学部, 教授 (00291542)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 腎癌 / ノックアウトマウス / Hippoパスウェイ

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、ccRCCの発症と悪性化を忠実に模倣するモデルを作製する目的で、腎臓だけで癌抑制遺伝子VHLとSAV1の遺伝子がダブルにノックアウトされるマウスを作成する。さらに遺伝子欠失の時期が生後数週間たってから起きる誘導性のノックアウトマウスとする。癌の進行・進展の過程を忠実に再現できるモデルマウスの作製により、腎癌の発生から悪性化に至るメカニズムを解明するだけでなく、Hippoパスウェイをターゲットとした治療の有効性を証明することにより、真に予後不良な高悪性度腎癌の治療標的を明確し、モデルマウスを用いた治療法の評価系を構築することを目指す。2018年度は、VHL単独、SAV1単独、VHLとSAV1のダブルノックアウトマウスを作成した。ホモノックアウトマウスは出生しないか、出生後すぐに死亡した。死亡したマウスの腎臓には嚢胞が散見された。2019年度から2020年度には、2018年度から作成を続けているノックアウトマウスについて、腎臓の組織学的変化や免疫組織学的解析を行った。SAV1, VHL, SAV1+VHLでの遺伝子欠失の組み合わせによって腎発生や嚢胞のでき方について解析した。特にSAV1に着目し、腎の正常発生に異常がみられること、発生初期にはSAV1のヘテロノックアウトマウスでも異常がみられることを明らかにした。またSAV1とVHLのノックアウトマウスでは、形成される嚢胞の形態等に違いがあることがわかった。血清を採取し、腎機能や体重を測定した。また新たな誘導性のCre発現系マウスを作成した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

2021年度は新たな誘導系ノックアウトマウスの生後6－7週の段階でtamoxifenを腹腔内投与5日間し、生後6ヶ月して全身臓器を観察したところ、肝臓でやや脂肪織の沈着がめだった。現在、この系の作成継続とtamoxifen投与後1年での臓器観察を予定している。また、腎の発生について統計学的に解析できる個体数を確保すべく、当初からの系統作成を続けている。

Strategy for Future Research Activity

ホモおよびヘテロノックアウトマウスについてSAV1, VHL, SAV1+VHLでの遺伝子欠失の組み合わせによって腎発生や嚢胞のでき方および体重、腎重量や腎機能について、0週、1週、2週、3週、4週、5週でのそれぞれのマウスでの統計学的に解析し比較する。
新たな誘導性のCre発現系マウスは生後6－7週の段階でtamoxifenを腹腔内投与5日間し、生後1年間等で全身の臓器の変化を観察し、腎臓、肝臓、心臓等に着目し、変化のメカニズムを解明してく予定である。

Causes of Carryover

2021年度には、大学動物舎の改築等の関係上、ノックアウトマウスの繁殖数が制限され、PCR,、マウス等物品費に係る予算が当初計画より少なかった。また新型コロナウイルス感染症により物品の請求が出来ないことが生じた。
次年度使用額については、マウスの解析をさらにすすめるための物品費として使用する計画である。

Research Products

• [Journal Article] Notes on Morphology and Life History of Probstmayria gombensis (Nematoda: Cosmocercoidea: Atractidae), Parasitic in Eastern Chimpanzees, Pan troglodytes schweinfurthii, in Bulindi, Uganda (2021)
  • Author(s): Hasegawa, H., McLennan, M. R., Huffman, M. A., Matsuura, K.
  • Journal Title: J Parasitol Volume: 107(2) Pages: 155-162
  • DOI: 10.1645/20-88.
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research